活动性肺结核患者血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST及单核细胞P糖蛋白水平及其临床意义

张会玲, 高海彦

武威市凉州医院检验科,甘肃武威 733000

活动性肺结核(active pulmonary tuberculosis,APTB)是以结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)繁殖活跃且毒性极高为主要特征的肺结核,易造成传播和感染,采用有效的监测指标早期评估对控制结核病的传播具有重要意义[1]。随着近年分子免疫和细胞学的发展,细胞因子和免疫细胞在APTB免疫机制中的作用已成为APTB临床研究的热点[2]。Fad D9重组蛋白是以脂肪酸-CoA连接酶形式参与结核杆菌脂质降解过程的脂质代谢相关基因,可诱导Th1细胞因子,对结核杆菌在体内扩散具有抑制作用[3]。可溶性白细胞分化抗原14亚型(sCD14-ST)是细菌表面脂多糖与单核巨噬细胞结合形成的可溶性糖蛋白片段,常作为急性时相反应标志物应用于感染性疾病的临床诊断[4]。单核细胞P糖蛋白(monocyte P-glycoprotein,Pgp)是ATP结合盒转运体家族中最具代表性的蛋白,可上调细胞外排转运体的表达,有利于维持细胞内环境稳态[5]。目前临床关于血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST及Pgp与结核病病情的相关报道较少,因此本研究分析APTB患者血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST、Pgp水平及其临床意义,旨在为APTB的临床诊断提供新的监测指标。

1 资料和方法

1.1 研究对象

选取本院2019年1月—2021年1月收治的96例APTB患者纳入APTB组,年龄(39.17±5.12)岁,男57例,女39例,血沉(37.13±7.49)mm/h。纳入标准:符合APTB诊断标准[6];接受2HRZE/4HR治疗方案;临床资料完整。排除标准:合并乙肝病毒、丙肝病毒或人类免疫缺陷病毒感染;合并慢性肾脏疾病、恶性肿瘤;3个月内使用免疫抑制剂;未规律服用抗结核药物;合并骨关节炎、风湿病等自身免疫疾病。所有患者均行胸部CT检查,按照肺部病灶有无空洞和病灶肺叶数(病灶肺叶≥3个或病灶肺叶<3个)分亚组。另选择同期体检健康且经γ干扰素释放试验(interferon-gamma release assay,IGRA)检测阴性或者阳性各48例分别纳入健康对照(health control,HC)组和结核潜伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)组。HC组年龄(38.74±5.26)岁,男26例,女22例。LTBI组年龄(38.05±5.11)岁,男25例,女23例。各组一般资料比较差异无显著性(P>0.05)。本研究经本院伦理委员会审批通过,所有受试者均知情同意。

1.2 Fad D9重组蛋白的检测

以MTB H37Rv为模板基因组,使用Fad D9基因(序列号888574)的上下游引物进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),产物经扩大培养、裂解和纯化后获得Fad D9重组蛋白,并进行电泳鉴定纯度。采集各组空腹静脉血3 mL,离心后按1∶100稀释为一抗,以过氧化物酶标记的山羊抗人IgG按1∶3 000稀释为二抗,将Fad D9重组蛋白作为抗原包被96孔板,检测Fad D9重组蛋白抗体特异性反应水平。以Fad D9重组蛋白为抗原与全血样本37 ℃共孵育20～24 h,离心分离血浆,并进行IGRA,ELISA试剂盒购自北京万泰生物药业股份有限公司。将检测结果与试剂盒中的标准管进行比对,检测Fad D9重组蛋白在临床血浆样本中激起的细胞免疫水平,以血清Fad D9重组蛋白水平表示Fad D9重组蛋白表达水平。

1.3 血清sCD14-ST和Pgp水平的检测

采用酶联免疫法检测各组血清sCD14-ST和Pgp水平,试剂盒由上海机纯实业有限公司和陕西伊诺纳尔生物科技有限公司生产,所有检验操作均严格按试剂说明书执行。

1.4 统计学处理

2 结 果

2.1 各组Fad D9重组蛋白、sCD14-ST和Pgp水平的比较

Fad D9重组蛋白、sCD14-ST、Pgp水平APTB组>LTBI组>HC组;且有空洞组高于无空洞组,病灶肺叶≥3个组高于<3个组(P<0.05;表1)。

2.2 Fad D9重组蛋白、sCD14-ST和Pgp的诊断效能

血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST、Pgp对APTB诊断和APTB、LTBI鉴别有良好效能(P<0.001;图1和图2)。

图1 血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST、Pgp对APTB诊断的ROC曲线

图2 血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST、Pgp对LTBI鉴别诊断的ROC曲线

3 讨 论

APTB患者肺组织内MTB持续增殖且传播活跃,影像学检查可见肺部斑片状渗出或形成空洞和播散性病变[7]。有研究显示,APTB临床表现具有明显的异质性,检测相关因子水平变化情况,对判断结核的活动性及监测评估病情具有重要的意义[8]。

本研究结果显示,APTB组血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST和Pgp水平均高于LTBI组和HC组,与张君丽等[3]研究结果类似,说明上述指标在APTB组与LTBI组中均显著升高,其中APTB组各指标升高更为显著。γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)是对MTB感染具有控制作用的细胞因子,Fad D9重组蛋白可通过调控IFN-γ的分泌发挥其对MTB在体内传播的细胞免疫作用[9]。机体感染MTB时,细胞吞噬MTB过程中有大量溶酶体酶参与,促使细胞膜上sCD14大量释放入血[10]。本研究ROC曲线结果显示,血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST和Pgp对APTB和LTBI鉴别具有较好的诊断效能,血清Fad D9重组蛋白诊断效能高于sCD14-ST和Pgp,说明血清Fad D9重组蛋白可作为APTB筛查和MTB潜伏感染的可靠监测指标。

本研究结果显示,APTB患者血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST和Pgp水平在有空洞和病灶肺叶≥3个的APTB患者中异常升高。大量T细胞表位的Fad D9蛋白可诱导Th1型细胞免疫反应,其血清含量可评估机体免疫损伤程度。sCD14-ST是产生于CD14细菌感染中的N端片段,机体出现免疫系统抑制时,抗原免疫逃逸使病情加重。严重的MTB感染时,细胞可通过诱导上调Pgp表达,以减少外源性有害物质伤害。麦精兰[11]与马清艳等[12]研究发现,血清标志物sCD14-ST与Pgp在耐多药肺结核患者血清水平升高与病情进展有关,与本研究类似,提示Fad D9重组蛋白、sCD14-ST及Pgp对APTB病情严重程度评估具有一定的监测意义。

综上所述,Fad D9重组蛋白、sCD14-ST及Pgp在APTB患者血清中明显升高,且与肺部病灶的严重程度有关。本研究的不足之处在于未就上述指标对APTB疗效评估的价值进行探讨,后续仍需加大样本量深入研究验证。