鲍鱼性腺多糖抗血栓及抗疲劳活性的研究

郭 丽 莉, 朱 蓓 薇, 孙 黎 明, 牛 海 铃, 秦 磊, 刘 俊 荣

(1.大连工业大学 海洋食品教育部工程研究中心, 辽宁 大连 116034;2.大连工业大学 农业部农产品加工技术研发贝类专业分中心, 辽宁 大连 116034;3.大连海洋大学 食品工程学院, 辽宁 大连 116023)

0 引 言

海洋贝类因其营养丰富、味道鲜美而被人们所熟知。除此之外,贝类多糖具有抗肿瘤、增强免疫力等活性,因而贝类也成为新药和功能食品开发的重要原料[1]。本实验室对鲍鱼多糖已经进行了比较系统的研究,发现鲍鱼脏器及性腺多糖均具有一定的抗氧化活性[2-4]、抗肿瘤、免疫增强[5-7]及抗凝血[7]等活性。本研究以雌性皱纹盘鲍(HaliotisDiscusHannaiIno)性腺为原料,根据本实验室已确定的方法提取鲍鱼性腺粗多糖(CAGP),分别考察其体外溶解血栓及抗疲劳活性,以期为鲍鱼性腺多糖的进一步开发利用奠定基础。

1 实 验

1.1 原 料

鲍鱼性腺多糖:本实验室制备[7]。

昆明种雌性小鼠(SPF级)30只,体重18～20 g；雄性SD大鼠3只,体重50～70 g,均购自大连医科大学实验动物中心。

乳酸、尿素氮、糖原及乳酸脱氢酶检测试剂盒,均购自南京建成生物制剂研究所。

1.2 鲍鱼性腺多糖的体外溶栓能力检测

取雄性SD大鼠,经腹主动脉插管放血至长约2 m、直径3 mm 的塑料管中,夹闭两端,于室温放置24 h 后,将血凝块切成质量约为50 mg 的小段,精密称取,分别置入含有低、中、高剂量CAGP(50、100和200 μg/ mL)、柠檬酸钠(10%)和生理盐水各2 mL的试管中,37 ℃ 温浴24 h 后取出称取剩余血凝块的质量,计算血块溶解率[8-9]。血块溶解率=(溶解前血凝块湿重-溶解后血凝块湿重)/溶解前血凝块湿重。

1.3 鲍鱼性腺多糖抗疲劳活性检测

1.3.1 动物分组与处理

取30只昆明种小鼠随机分为空白对照组(等体积的生理盐水)、CAGP组(200 mg/kg)和阳性对照组(香菇多糖,80 mg/kg),按10 mL/kg的剂量灌胃,每天1次,连续35 d。

1.3.2 检测指标及方法

负重游泳时间：末次给药30 min后,小鼠尾部负荷8%体重的砝码。放入水深30 cm,水温(34±1)℃的游泳箱中进行实验,判断标准按Dawson法[10],用秒表记录动物自投入水中开始游泳至头部全部沉入水中8 s不能浮出水面的时间作为小鼠持续游泳时间。

尿素氮、乳酸、乳酸脱氢酶、糖原的测定：末次给药1 h后,在温度30 ℃的水箱中不负重游泳90 min。休息60 min后摘眼球采全血约0.5 mL。2 000 r/min离心15 min,取上层血清,按试剂盒要求进行尿素氮、乳酸及乳酸脱氢酶的测定。断椎处死小鼠,解剖取肝脏,经生理盐水漂洗后用滤纸吸净水分准确称取100 mg肝组织和后肢肌肉组织,按试剂盒要求进行糖原测定。

血红蛋白含量测定：取上述离心取上层血清后剩下的血红细胞20 μL,加2 mL蒸馏水稀释,室温静止放置30 min,使红细胞发生溶血释放出全部血红蛋白,再用蒸馏水4倍稀释上述溶液,然后在413 nm下测其吸光值。

1.4 统计学方法

数据用SPSS16.0软件进行统计学分析,结果以(平均值±标准偏差)表示。P<0.05表示有显著性差异,P<0.01表示差异极其显著。

2 结果与讨论

2.1 鲍鱼性腺多糖的体外溶栓作用

表1显示,与生理盐水组比较,CAGP低剂量、CAGP高剂量及阳性对照柠檬酸钠均具有明显的溶栓能力,50和200 μg/mL的CAGP的溶栓率分别为62.95%和67.70%。目前,对于多糖研究较多的是抗凝血作用,溶栓作用还少有报道。体外溶栓作用的研究主要集中在生物酶及中药组分[8-9]。本研究中鲍鱼性腺多糖CAGP为具有一定蛋白含量的多糖提取物,其溶栓作用的具体机制有待于深入研究。

表1 CAGP的体外溶栓作用(n=3)

2.2 CAGP对小鼠糖原及血红蛋白含量的影响

表2 CAGP对小鼠肝糖原、肌糖原及血红蛋白含量的影响(n=10)

表2显示,与空白对照组相比,CAGP能够明显提高肝脏和肌肉组织中糖原含量,说明CAGP能提高组织糖原的贮备能力。糖原贮备的增加有利于提高机体耐力。阳性对照也可明显提高肝组织中糖原含量,但对肌肉中糖原含量的提高不明显。 由表2可知,CAGP组、阳性对照组的血红蛋白含量均明显升高,说明CAGP能够促进体内血红蛋白的合成。血红蛋白含量的提高能够为运动提供更多的氧,从而达到缓解疲劳的效果。

2.3 CAGP对小鼠乳酸、尿素氮及乳酸脱氢酶活力的影响

表3 CAGP对小鼠乳酸脱氢酶活力、乳酸及尿素氮含量的影响(n=10)

表3显示,与空白对照组相比,CAGP组和阳性对照组的血清乳酸的含量均明显降低,而且这两组的血清乳酸脱氢酶活力均明显提高。鲍鱼性腺多糖可能通过提高机体乳酸脱氢酶活力,加速运动后乳酸的代谢,减少乳酸堆积,从而改善运动疲劳。CAGP组和阳性对照组血清尿素氮的含量较空白对照组有所降低,但无统计学显著差异。

2.4 CAGP对小鼠负重游泳时间的影响

表4显示,与空白对照组比较,CAGP组和阳性对照组小鼠的负重游泳时间均明显延长,分别是空白对照组的1.46和1.73倍。抗疲劳能力的加强主要表现为运动耐力的提高,小鼠负重游泳时间的长短可以反映小鼠运动疲劳的程度。因此,CAGP能提高小鼠的运动耐力,具有抗疲劳活性。

表4 CAGP对小鼠负重游泳时间的影响(n=10)

Tab.4 Effect of CAGP on swimming endurance exercise(n=10)

组别w/(mg·kg-1)t(游泳)/min空白对照组3.57±0.71CAGP2005.22±0.87∗阳性对照组806.50±0.94∗∗注:∗表示P<0.05(同空白对照组比);∗∗表示P<0.01(同空白对照组比)。

3 结 论

CAGP具有一定的体外血栓溶解作用,其溶栓作用很可能与其蛋白部分的酶活力有关。CAGP具有抗疲劳活性,在CAGP的作用下,小鼠负重游泳时间明显延长,肝脏糖原、肌肉糖原和血红蛋白的含量以及血清乳酸脱氢酶活力显著提高,血清中乳酸含量有效降低。

[1] 刘锐. 多糖类物质的研究进展[J]. 安徽农业科学, 2005, 33(9):1722-1724.

[2] ZHU Beiwei, WANG Lisha, ZHOU Dayong, et al. Antioxidant activity of sulphated polysaccharide conjugates from abalone (HaliotisdiscushannaiIno)[J]. European Food Research and Technology, 2008, 227:1663-1668.

[3] ZHU Beiwei, ZHOU Dayong, LI Tao, et al. Chemical composition and free radical scavenging activities of a sulphated polysaccharide extracted from abalone gonad (HaliotisDiscusHannaiIno)[J]. Food Chemistry, 2010, 121:712-718.

[4] 王莅莎,朱蓓薇,周大勇,等. 鲍鱼脏器多糖的抗氧化活性研究[J]. 食品与机械, 2008, 24(4):65-68.

[5] 朱莉莉,孙黎明,李冬梅,等. 鲍鱼内脏蛋白多糖体内对H22肝癌的抑制作用[J]. 营养学报, 2009, 31(5):478-481.

[6] SUN Liming, ZHU Beiwei, LI Dongmei, et al. Purification and bioactivity of a sulphated polysaccharide conjugate from viscera of abaloneHaliotisdiscushannaiIno[J]. Food and Agricultural Immunology, 2010, 21(1):15-26.

[7] 徐美玲,孙黎明,周大勇,等. 皱纹盘鲍性腺多糖体外免疫活性和抗凝血活性的研究[J]. 水产科学, 2009, 28(9):498-500.

[8] 李江伟,冉国侠,陈新梅. 豆豉溶栓酶的分离纯化及其体外溶栓作用[J]. 中国生化药物杂志, 1999, 20 (3):148-150.

[9] 朱虹,吴强,徐明,等. 黄芪总提物体内外抗血栓作用的实验研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2005, 10(8):917-920.

[10] DAWSON C A. Swimming in small laboratory animals[J]. Medicine & Science in Sports & Exercise, 1970, 2(2):51-78.