高迁移率族蛋白A1、碱性成纤维细胞生长因子、促红细胞生成素在宫颈癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系

卢书芳，闫秀玲，孙晓娜

平煤神马医疗集团总医院妇产科，河南 平顶山4670000

宫颈癌是临床常见的妇科恶性肿瘤之一，目前，临床治疗以根治性手术为主，但多数宫颈癌患者早期症状不明显，因此，就诊时多已处于中晚期，失去了最佳的手术治疗机会，研究发现，高危HPV 持续感染进展为宫颈癌所需要的时间较长，随着肿瘤分子生物学的发展，肿瘤的发生、发展与协同因子有关，如原癌基因的激活、抑癌基因的失活及相关基因的异常表达。高迁移率族蛋白A1（high mobility group protein A1，HMGA1）属于染色质相关蛋白，在多种恶性肿瘤上皮组织中过表达，且与肿瘤发生发展及患者的预后密切相关；碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）与肿瘤新生血管生成密切相关；促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）属于糖蛋白细胞因子，可参与肿瘤细胞抗凋亡、抗缺氧及肿瘤新生血管生成过程，目前，上述三种因子在宫颈癌中表达情况的临床报道相对少见。基于此，本研究探讨HMGA1、bFGF、EPO 在宫颈癌中的表达及与患者预后的关系，以期为临床提供指导和依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017 年1 月至2020 年6 月平煤神马医疗集团总医院收治的宫颈癌患者。纳入标准：①经病理学检查确诊为宫颈癌；②年龄18～60 岁；③均接受宫颈癌根治术治疗；④术前未接受放化疗等治疗；⑤临床随访资料完整。排除标准：①合并其他系统恶性肿瘤；②合并免疫系统疾病、血液系统疾病。依据纳入和排除标准，本研究共纳入98 例宫颈癌患者，年龄（50.98±9.65）岁；体重指数（body mass index，BMI）为（22.84±3.55）kg/m；已育63 例，未育35 例；绝经59 例。同时选取本院收治的50 例子宫肌瘤患者，均接受子宫全切术治疗，无肝肾功能障碍、免疫系统疾病、血液系统疾病等，年龄（49.32±8.19）岁；BMI 为（22.60±4.12）kg/m；已育33例，未育17 例；绝经31 例。两组患者年龄、BMI 和生育情况等临床特征比较，差异均无统计学意义（

P

﹥0.05），具有可比性。取98 例宫颈癌患者的宫颈癌组织和50 例子宫内膜癌患者的正常宫颈组织，备检。

1.2 免疫组化法检测HMGA1、bFGF、EPO 的表达情况

取98 例宫颈癌组织和50 例正常宫颈组织中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片，厚度为3 μm，烘烤切片，置入10%二甲苯脱蜡10 min，分别置于100%、95%、85%、75%浓度梯度的乙醇中2 min，蒸馏水浸泡2 次，每次2 min。3%过氧化氢去离子水孵育10 min，蒸馏水冲洗2 min，滴加HMGA1、bFGF、EPO一抗和二抗[反应条件：37 ℃温箱孵育20 min，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）冲洗4 次，每次2 min]，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，苏木素复染10 min，盐酸乙醇分化3 s，氨水反蓝3 s，中性树胶封片。

1.3 免疫组化法结果判定

HMGA1、bFGF、EPO 主要定位于细胞核，未着色为阴性，细胞核呈黄色或棕黄色染色为阳性，其中着色略深为1 分，着色较深为2 分，明显加深为3分。阳性细胞所占比例：﹤5%为0 分，5%～10%为1分，11%～25%为2 分，26%～50%为3 分，﹥50%为4分。每张切片随机观察5 个高倍视野，每个视野计数100 个细胞，取平均值。将着色强度与阳性细胞所占比例评分相加，≥4 分为阳性，﹤4 分为阴性。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 HMGA1、bFGF、EPO 表达情况的比较

宫颈癌组织中HMGA1、bFGF 和EPO 阳性表达率均明显高于正常宫颈组织，差异均有统计学意义（

P

﹤0.05）。（表1）

表1 宫颈癌组织和正常宫颈组织中HMGA1、bFGF、EPO阳性表达率的比较[n（%）]

2.2 不同临床特征宫颈癌患者宫颈癌组织中HMGA1、bFGF、EPO 表达情况的比较

不同年龄、BMI、绝经情况、生育情况、病理类型、分化程度和淋巴结转移情况宫颈癌患者宫颈癌组织中HMGA1、bFGF、EPO 阳性表达率比较，差异均无统计学意义（

P

﹥0.05）。国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期为Ⅱ期的宫颈癌患者宫颈癌组织中HMGA1、bFGF 阳性表达率均高于FIGO 分期为Ⅰ期的患者，差异均有统计学意义（

χ

=7.760、17.626，

P

﹤0.05）；FIGO 分期为Ⅱ期、分化程度为低分化、有淋巴结转移的宫颈癌患者宫颈癌组织中EPO 阳性表达率均高于FIGO 分期为Ⅰ期、分化程度为中高分化和无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（

χ

=10.906、6.584、7.510，

P

﹤0.05）。（表2）

表2 不同临床特征宫颈癌患者宫颈癌组织中HMGA1、bFGF、EPO 阳性表达率的比较（n=98）

2.3 HMGA1、bFGF、EPO 表达的相关性分析

HMGA1 的表达与bFGF 的表达无相关性（

P

﹥0.05），与EPO 的表达呈正相关（

r

=0.337，

P

﹤0.05），bFGF 表达与EPO 的表达呈正相关（

r

=0.414，

P

﹤0.05）。

2.4 MGA1、bFGF、EPO 的表达与宫颈癌患者预后的关系

采用门诊、电话随访的方式对宫颈癌患者进行5～32 个月的随访，随访时间截至2020 年11 月，98例宫颈癌患者复发31 例，未复发67 例。复发与未复发宫颈癌患者的复发患者HMGA1、bFGF 阳性表达率比较，差异均无统计学意义（

P

﹥0.05）；复发宫颈癌患者EPO 阳性表达率高于未复发患者，差异有统计学意义（

P

﹤0.05）。（表3）

表3 复发和未复发宫颈癌患者HMGA1、bFGF、EPO 阳性表达率的比较[n（%）]

3 讨论

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁女性的身心健康和生命安全，目前，全球范围内，每年新发宫颈癌患者近50 万例，其中4/5 发生于发展中国家，近年来随着早期诊断技术的不断发展，宫颈癌的早期诊断率明显提升。目前，临床主要采用手术切除治疗早期宫颈癌，手术更适合应用于Ⅰa～Ⅱa 期患者，而晚期病变进行手术治疗的预后较差，可以采取新辅助化疗减少病灶间质浸润与淋巴结转移的风险后，再进行手术治疗。以往临床主要根据查体、活检或内镜检查结果明确宫颈癌患者的临床分期，但由于难以确认肿瘤浸润范围及浸润深度，导致分期准确度较差，影响了宫颈癌治疗方案的确定。早期明确诊断宫颈癌并准确进行临床分期，对治疗方案的选择和患者预后的改善均有重要意义，目前，影响宫颈癌发病的具体机制尚未明确，主要经过癌前病变、原位癌、浸润癌的连续演变过程，受到环境、宿主及病毒等多种因素的影响，因此，如何准确评估宫颈癌的病理特征已成为临床宫颈癌治疗的关键。

本研究探讨分子生物学指标HMGA1、bFGF、EPO 在宫颈癌中的表达，其中HMGA1 属于染色体相关蛋白，广泛存在于真核生物细胞中，研究发现，HMGA1 可影响正常的生物学过程，通过与核小体结合参与细胞分裂过程中的染色体运动，同时维持染色质结构，参与基因调节，通过参与增强子复合物的形成与蛋白质相互作用调节基因转录，并参与长序列启动子基因的调控。本研究结果显示，HMGA1 在宫颈癌组织中的表达明显上调，有学者发现，HMGA1 在宫颈癌组织中高表达，在正常的宫颈上皮组织中几乎不表达，且在浸润性宫颈癌中呈强阳性表达，表明HMGA1 可以作为诊断浸润性宫颈癌的重要方法，且其表达强度与宫颈上皮病变程度呈正相关，与本研究结果相似。bFGF 一般由内皮细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞分泌，主要作用是促进内皮细胞游走与平滑肌细胞增殖，因此，bFGF 具有促进肿瘤新生血管生成的作用，有学者采用免疫组化法检测bFGF 在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织中的表达情况，结果发现，bFGF 可作为评估宫颈癌细胞生物学行为的客观指标，且与宫颈癌患者临床分期、组织学分级、淋巴结转移情况和宫旁浸润有关。EPO则属于对热和酸稳定的酸性糖蛋白质，由浅表肾单位的肾小管周围毛细血管内皮细胞或成纤维细胞合成，研究显示，肿瘤细胞分泌EPO，主要参与抗凋亡、抗缺氧、促进肿瘤新生血管生成、调节免疫功能、协同相关细胞因子的作用，其中促进肿瘤新生血管生成是通过促内皮细胞增殖、转变为管状结构、促进管状结构延长实现。

本研究结果显示，宫颈癌组织中HMGA1、bFGF 和EPO 的阳性表达率均明显高于正常宫颈组织，表明HMGA1、bFGF 和EPO 在宫颈癌患者中均呈异常高表达。本研究结果显示，FIGO 分期为Ⅱ期的宫颈癌患者宫颈癌组织中HMGA1、bFGF 阳性表达率均高于FIGO 分期为Ⅰ期的患者，FIGO 分期为Ⅱ期、分化程度为低分化、有淋巴结转移的宫颈癌患者宫颈癌组织中EPO 阳性表达率均高于FIGO 分期为Ⅰ期、分化程度为中高分化和无淋巴结转移的患者。表明HMGA1、bFGF、EPO 与肿瘤临床分期可能有关，EPO 还可能与淋巴结转移和分化程度有关。研究发现，EPO 属于肾脏分泌活性糖蛋白，可造成骨髓中红系造血祖细胞增殖、分化，因此，宫颈癌复发患者由于肿瘤细胞增殖可导致EPO 表达阳性。有学者发现，局部微环境缺氧是宫颈上皮内瘤变进展的重要影响因素之一，EPO为缺氧调节因子，其过表达与恶性肿瘤转移和复发密切相关，与本研究结果相似。本研究结果发现，复发宫颈癌患者EPO 阳性表达率高于未复发患者。本研究探讨HMGA1、bFGF、EPO 在宫颈癌中的表达情况与患者的临床特征有关，可影响肿瘤的生物学行为，对肿瘤的早期诊断、预后评估及治疗方案的制订均有重要意义，可通过某种方式下调或抑制相关因子的表达以对宫颈癌进行治疗，但仍有待进一歩研究。

综上述所，HMGA1、bFGF、EPO 在宫颈癌组织中表达上调，其与宫颈癌患者的FIGO 分期、淋巴结转移情况及分化程度可能有关，EPO 的表达可能与宫颈癌根治术术后患者的复发风险有关。