早期乳腺浸润性导管癌组织中雌激素受体、孕激素受体、细胞核增殖相关抗原Ki-67的表达情况及临床意义

陈培勤，肖秀娣，徐雪松，薛娣

镇江市第一人民医院乳腺外科，江苏 镇江2120000

作为常见的女性恶性肿瘤，乳腺癌在女性群体中的发病率居全部恶性肿瘤的第2位，其发病率目前仍以每年2%的速度递增[1]。近年来的统计数据表明，乳腺癌的发病呈年轻化趋势，对广大女性的生命健康造成了严重威胁[2]。由于检测技术及治疗手段的不断进步，乳腺癌患者的疾病控制率及总生存期获得了明显改善，但其复发率及远处转移率仍较高[3]。研究显示，雌激素受体（estrogen receptor，ER）、孕激素受体（progesterone receptor，PR）、细胞核增殖相关抗原Ki-67在乳腺癌的发生及发展过程中具有重要意义[4]。乳腺浸润性导管癌是乳腺癌中最常见的一种，本研究通过分析早期乳腺浸润性导管癌患者中ER、PR及Ki-67的表达情况和临床意义，旨在为其临床治疗提供依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2013年2月至2015年2月镇江市第一人民医院收治的早期乳腺浸润性导管癌患者。纳入标准：①经病理学检查确诊为乳腺浸润性导管癌，临床分期为I～Ⅱ期；②未接受过放疗、化疗、靶向治疗或内分泌治疗；③临床资料完整；④未合并其他恶性肿瘤或严重基础病。排除标准：①具有严重传染性疾病；②病理活检显示为乳腺癌复发或转移病灶。依据纳入和排除标准，本研究共纳入102例患者。102例患者均为女性，年龄为28～69岁，平均年龄为（52.67±3.28）岁；组织学分级[5]：I级65例，Ⅱ级37例；临床分期：I期58例，Ⅱ期44例。

1.2 主要试剂

ER、PR及Ki-67抗体均购自福州迈新生物技术开发有限公司，荧光免疫二抗、磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）、二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）均购自北京艾然生物科技有限公司。

1.3 免疫组织化学染色方法

收集患者的乳腺浸润性导管癌组织，4%甲醛溶液固定，石蜡包埋。然后将石蜡标本切成厚约4 μm的切片，置于经多聚赖氨酸处理过的载玻片上，采用3%过氧化氢溶液处理0.5 h，然后利用高压锅对切片组织进行抗原热修复，时间为10 min，室温下冷却后加入ER、PR及Ki-67抗体，放入湿盒中并置于4℃无菌冰箱孵育过夜；取出后采用PBS反复冲洗，加入生物素标记的二抗，室温孵育30 min，PBS再次充分冲洗，然后加入DAB进行显色；蒸馏水洗涤，苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树脂封片，显微镜下观察。以已知的阳性切片作为阳性对照，PBS作为阴性对照。

1.4 免疫组织化学染色结果判定

ER、PR及Ki-67阳性表达均位于细胞核，呈棕黄色颗粒。每张切片随机选取5个高倍镜视野（×400），依据阳性细胞所占比例及染色强度进行评分。依据阳性细胞所占比例评分：≤10%为0分，11%～25%为1分，26%～50%为2分，＞50%为3分。依据染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。阳性细胞所占比例评分与染色强度评分相加，≥2分为阳性，＜2分为阴性[6]。

1.5 随访

采用门诊、电话及上门随访的方式对所有患者进行随访，随访截止时间为2019年12月，统计所有患者的生存情况。

1.6 统计学分析

采用SPSS 19.0软件对数据进行统计分析，计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；采用Spearman相关分析法进行相关性分析；采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，组间比较采用Log-rank检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 早期乳腺浸润性导管癌组织中ER、PR及Ki-67的表达情况

102例患者中，ER、PR和Ki-67的阳性表达率分别为59.80%（61/102）、56.86%（58/102）和68.63%（70/102）。

2.2 不同临床特征早期乳腺浸润性导管癌患者中ER、PR及Ki-67表达情况的比较

不同年龄、肿瘤直径、临床分期的早期乳腺浸润性导管癌患者中ER、PR的阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。不同年龄的早期乳腺浸润性导管癌患者中Ki-67的阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；肿瘤直径≥2 cm、TNM分期为Ⅱ期的早期乳腺浸润性导管癌患者中Ki-67的阳性表达率分别高于肿瘤直径＜2 cm、TNM分期为I期的患者，差异均有统计学意义（χ2=6.195、4.284，P＜0.05）。（表1）

表1 不同临床特征早期乳腺浸润性导管癌患者中ER、PR及Ki-67的表达情况（n=102）

2.3 ER、PR及Ki-67表达情况的相关性

102例早期乳腺浸润性导管癌患者中，ER与PR表达呈正相关（r=0.425，P＜0.05），ER与Ki-67表达呈负相关（r=-0.217，P＜0.05），PR与Ki-67表达呈负相关（r=-0.264，P＜0.05）。（表2～表4）

表2 早期乳腺浸润性导管癌患者中ER和PR的表达情况

表3 早期乳腺浸润性导管癌患者中ER和Ki-67的表达情况

表4 早期乳腺浸润性导管癌患者中PR和Ki-67的表达情况

2.4 生存情况的比较

ER阳性和ER阴性患者的5年生存情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。PR阳性和PR阴性患者的5年生存情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。Ki-67阴性患者的5年生存情况优于Ki-67阳性患者，差异有统计学意义（χ2=3.265，P＜0.05）。（图1～图3）

图1 ER阳性（n=61）和ER阴性（n=41）早期乳腺浸润性导管癌患者的生存曲线

图2 PR阳性（n=58）和PR阴性（n=44）早期乳腺浸润性导管癌患者的生存曲线

图3 Ki-67阳性（n=70）和Ki-67阴性（n=32）早期乳腺浸润性导管癌患者的生存曲线

3 讨论

乳腺癌最早可见于5000多年前的古埃及文献中，里面记载了8例乳房溃疡及隆起肿瘤病例[7]。近年来，乳腺癌的发病率逐年增加，且呈年轻化趋势，本研究中，乳腺癌患者的最小年龄仅为28岁，证实了这一说法。有报道称，30岁以下乳腺癌患者占全部乳腺癌患者的1.5%～2.0%[8]。因此，年轻女性若出现乳房触及肿块等症状应及时检查，避免漏诊。乳腺癌的发病高峰年龄为40～59岁，本研究中，50岁及以上患者占53.92%，因此对中老年女性应给予高度重视。

随着分子生物学的不断发展，关于乳腺癌分子水平的探索逐渐深入，乳腺癌分子水平的发病机制越来越受到研究人员的关注[9]。Ki-67是一种与细胞增殖密切相关的非组蛋白的核蛋白，在正常组织中的表达水平极低，而在肿瘤组织中的表达水平较高，并随着疾病的发展和恶化呈现逐渐上升的趋势，能够较好地反映肿瘤细胞的增殖活性[10]。Ki-67于一次鼠源单克隆抗体检测中被发现，“Ki”源于当时研究者所在的德国Kiel大学，67是当时96孔板中发现该抗原的单克隆抗体的编号。Ki-67主要存在于细胞核中，在G0期不表达，G1后期开始出现，S期和G2期表达升高，M期升至峰值，细胞有丝分裂完毕后迅速降解[11]。研究表明，Ki-67高表达患者具有较高的化疗敏感性，更易发生耐药突变，对预后不利[12]。本研究结果显示，102例早期乳腺浸润性导管癌患者的Ki-67阳性表达率为68.63%，与闫山英等[13]报道的69.2%十分接近。本研究发现，早期乳腺浸润性导管癌患者的Ki-67阳性表达率可能与肿瘤直径及TNM分期有关，肿瘤直径≥2 cm、TNM分期为Ⅱ期的早期乳腺浸润性导管癌患者中Ki-67的阳性表达率分别高于肿瘤直径＜2 cm、TNM分期为I期的患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。ER的主要配体是17-β-雌二醇，是调节乳腺癌细胞存活、增殖、侵袭及肿瘤新生血管生成的下游基因，也是免疫组化法最常用的检测指标[14]。本研究中，ER的阳性表达率为59.80%，与汪海新等[15]报道的60.7%相似。国外研究表明，从乳腺导管原位癌到浸润性导管癌，ER的阳性表达率呈明显下降趋势，ER表达水平的下降表明肿瘤的进展不再依靠雌激素，通常转为侵袭性更强的表型并对内分泌治疗产生抗性[16]。PR是雌激素和雄激素受体结合诱导的产物，其数量与ER复合物在细胞核内的数量呈平衡关系，并显示ER功能机制的良性状态。PR与ER在生物学上的作用密切相关，PR是ER的重要靶基因，在乳腺癌早期阶段往往共同表达，ER、PR的阳性表达率越高，则细胞分化程度越高，恶性程度越低。本研究中，PR的阳性表达率为56.86%，且ER与PR的表达呈正相关。王冰涛等[17]研究显示，乳腺癌患者中ER与PR的阳性表达率分别为63.16%和75.79%，均高于本研究的结果，可能是因为本研究选取的病例均为浸润性导管癌，恶性程度较高。本研究还发现，Ki-67与ER、PR表达均呈负相关，即激素受体阴性的乳腺癌患者细胞增殖能力更好，与黄华俊等[18]报道的结果一致。本研究还分析了ER、PR及Ki-67表达情况与乳腺癌患者预后的关系，结果发现，Ki-67阴性患者的5年生存情况优于Ki-67阳性患者，差异有统计学意义（P＜0.05），推测Ki-67能够作为预测乳腺癌患者预后的潜在指标。

综上所述，ER、PR及Ki-67在乳腺浸润性导管癌的发生及发展过程中具有重要意义，能够作为预测乳腺癌生物学行为和预后的重要指标，对临床用药、延长患者生存期、减少恶性转化及复发具有重要意义。