亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1、存活蛋白在胶质瘤中的表达及对患者远期预后的影响

曹亮，谢军，曾海燕，严亿军，梁珂

铜川市人民医院神经外科，陕西 铜川 727000

胶质瘤是由神经外胚叶衍化来的胶质细胞肿瘤，是颅内最常见的一种原发性恶性肿瘤，多由脑部或髓胶质细胞恶变引起，起源于神经上皮，称为神经上皮肿瘤[1-2]。相关资料显示，近年来，原发性恶性胶质瘤发生率逐年递增，年增长率约为1.2%，中老年人群尤为明显[3]。手术为目前胶质瘤的首选治疗方式，可明显改善患者的病情，但患者的预后相对较差，易复发且总生存期较短。目前，随着肿瘤免疫治疗的进展，多靶点的分子免疫治疗已逐渐成为临床研究的焦点[4]。相关研究发现，亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1（leucine rich repeats and immunoglobulin like domains 1，LRIG1）在肺癌、膀胱癌、肾透明细胞癌中表达下调，是一种潜在抑癌基因；存活蛋白（survivin）是目前发现的最强的凋亡抑制因子，属于凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族成员，具有促进肿瘤细胞生长并抑制凋亡的作用，与肿瘤患者的预后密切相关[5]。基于此，本研究探讨LRIG1、survivin在胶质瘤中的表达及对患者远期预后的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年2月至2019年2月铜川市人民医院收治的胶质瘤患者。纳入标准：①符合《中国脑胶质瘤分子诊疗指南》[6]中胶质瘤的诊断标准，且经病理学检查确诊；②无远处转移；③原发脑胶质瘤且未行放化疗；④病历资料、随访资料完整。排除标准：①合并血液系统疾病、免疫功能障碍；②存在其他恶性肿瘤；③哺乳期或妊娠期女性；④合并心、肝、肾等功能障碍；⑤合并结缔组织病变；⑥存在脑脓肿等颅内感染性疾病。依据纳入和排除标准，本研究共纳入77例胶质瘤患者，其中男43例，女34例；年龄22~78岁，平均（54.42±6.08）岁；肿瘤分级[7]：低级别胶质瘤37例（其中Ⅰ级21例，Ⅱ级16例），高级别胶质瘤40例（其中Ⅲ级28例，Ⅳ级12例）。本研究经医院伦理委员会批准通过，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 免疫组化法检测LRIG1、survivin的表达情况

取77例胶质瘤患者的胶质瘤组织及相应癌旁组织，组织切片后脱蜡、水化。将标本浸泡于3%过氧化氢中20 min，封闭其内源性过氧化物酶活性。高压枸橼酸盐抗原修复，温水清洗后使用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）清洗3次，每次5 min，同时在其中滴加10%血清以阻断非特异性结合，放入37℃孵育箱10 min。滴加山羊抗人survivin多克隆抗体、兔抗人LRIG1多克隆抗体，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色5 min；苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯浸泡，中性树脂封片，观察染色情况。

根据阳性细胞所占比例及染色强度进行结果判定[8]：无阳性细胞计0分，阳性细胞所占比例为1%~25%计1分，阳性细胞所占比例为26%~50%计2分，阳性细胞所占比例＞50%计3分；无着色计0分，淡黄色染色计1分，棕黄色染色计2分，棕褐色染色计3分。将阳性细胞所占比例评分与染色强度评分相乘，≤3分为阴性，≥4分为阳性。

1.3 随访

采用回院复查、电话随访的方法对患者进行为期3年的随访，以患者死亡或随访结束为随访终点，记录患者的预后情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件对所有数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；胶质瘤患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归分析；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 LRIG1、survivin表达情况的比较

胶质瘤组织中LRIG1阳性表达率明显低于癌旁组织，survivin阳性表达率明显高于癌旁组织，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1）

表1 胶质瘤组织和癌旁组织中LRIG1、survivin表达情况的比较[n（%）]

2.2 不同预后情况胶质瘤患者胶质瘤组织中LRIG1、survivin表达情况的比较

随访3年，77例胶质瘤患者中死亡25例，生存52例。预后死亡胶质瘤患者胶质瘤组织中LRIG1阳性表达率低于生存患者，survivin阳性表达率高于生存患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表2）

表2 不同预后情况胶质瘤患者胶质瘤组织中LRIG1、survivin表达情况的比较[n（%）]

2.3 胶质瘤患者预后的影响因素分析

单因素分析结果显示，年龄、性别均可能与胶质瘤患者的预后无关（P＞0.05），肿瘤直径、肿瘤分级、LRIG1表达情况、survivin表达情况均可能与胶质瘤患者的预后有关（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示，肿瘤直径≥5 cm、高级别胶质瘤、LRIG1阴性表达、survivin阳性表达均是胶质瘤患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。（表3）

表3 胶质瘤患者预后影响因素的单因素和多因素分析

3 讨论

胶质瘤是常见的脑部恶性肿瘤，其发生、发展是多种基因及细胞因子共同作用的结果，具有进展快、侵袭性强、分化差等特点，也是临床治疗困难、患者预后差的主要原因[9]。研究表明，不同级别胶质瘤的生物学行为均具有恶性表现，虽然目前临床通过手术对胶质瘤的治疗取得了一定的效果，但脑胶质瘤发病机制复杂，与正常组织边界不清，可明显影响手术切除效果，影响患者的预后[10]。因此，寻找胶质瘤的致病机制及靶点具有重要意义。研究证实，脑胶质瘤的发生、发展是多种蛋白基因及细胞因子共同作用的结果，因此，寻找脑胶质瘤的分子标志物成为目前胶质瘤的研究方向[11]。

LRIG1是近年发现的一种受体酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinase，RTK）抑制剂，广泛存在于人体脑、心脏、肾脏等组织中，且在脑组织中表达水平最高[12]。既往有学者分析了LRIG1在多种上皮源性肿瘤细胞中的表达情况，结果发现，LRIG1在肿瘤组织中表达明显缺失或下调，表明LRIG1可能是一种抑癌基因[13]。本研究结果显示，胶质瘤组织中LRIG1的阳性表达率明显低于癌旁组织，表明LRIG1在病变组织中无表达或低表达，但在癌旁组织中高表达。进一步比较发现，预后死亡胶质瘤患者LRIG1阳性表达率低于生存组，提示LRIG1在胶质瘤发生、发展中发挥着重要作用。这可能是因为LRIG1的产物是单次跨膜蛋白，能够通过促进表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）泛素化来降解受体，其高表达状态能够抑制肿瘤细胞增殖、侵袭，促进其凋亡；同时，LRIG1表达缺失也是导致EGFR抑制信号消失及EGFR活化的重要原因，从而促进肿瘤的发生发展。但LRIG1具体作用机制尚有待更深入的研究确认。

IAP是重要的抗细胞凋亡因子，survivin作为其家族成员之一，具有强大的抗细胞凋亡及促进细胞有丝分裂的作用[14]。相关研究证实，survivin不仅在肺癌、结肠癌和非霍奇金淋巴瘤等肿瘤中高表达，还与胶质瘤细胞的生长、侵袭、转移等生物学关系密切相关[15]。本研究结果显示，胶质瘤组织中survivin的阳性表达率明显高于癌旁组织，表明survivin在胶质瘤中高表达，同时，预后死亡胶质瘤患者胶质瘤组织中survivin的阳性表达率高于生存患者，表明survivin高表达与患者的预后有关。考虑survivin表达上调可能与肿瘤组织中抑癌基因突变、癌基因缺失有关，survivin高表达在肿瘤组织内抑制细胞凋亡，抑制了细胞的生理性死亡，进一步加重了胶质瘤患者的病情，对胶质瘤的诊疗及预后判断有一定意义。

Logistic回归分析结果显示，肿瘤直径≥5 cm、高级别胶质瘤、LRIG1阴性表达、survivin阳性表达均是胶质瘤患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。提示临床治疗中需加强对伴随高危因素患者的干预，在治疗后对患者进行针对性的预防有利于改善患者的预后，以延长患者的生存期。

综上所述，胶质瘤组织中LRIG1呈阴性表达，survivin呈阳性表达，且二者均是胶质瘤患者预后的独立危险因素，临床可通过检测这两种指标为胶质瘤患者的远期预后评估提供参考。