CHFR基因编码蛋白在食管癌组织中的表达及临床病理学意义△

吴书胜　何义富　孙玉蓓　季楚舒#

1安徽省立医院西区（安徽省肿瘤医院）肿瘤内科一病区，合肥　230071

2安徽省立医院肿瘤化疗科，合肥　230001

CHFR基因编码蛋白在食管癌组织中的表达及临床病理学意义△

吴书胜1何义富2孙玉蓓2季楚舒2#

1安徽省立医院西区（安徽省肿瘤医院）肿瘤内科一病区，合肥230071

2安徽省立医院肿瘤化疗科，合肥230001

目的观察有丝分裂前期检查点基因CHFR在食管癌、食管上皮内瘤变及正常食管组织中蛋白的表达，了解食管癌中CHFR蛋白表达与患者临床病理资料之间的关系，探讨其在食管癌发生发展过程中的作用及相关的分子机制。方法收集食管癌标本92例以及相配对的食管上皮内瘤变11例，另取正常食管组织27例。采用免疫组化检测92例食管癌及其对应的食管上皮内瘤变、正常食管组织中CHFR蛋白的表达。通过免疫组化半定量积分法判断免疫组化结果。结果食管癌组织中CHFR蛋白阳性表达率为7.61%（7/92），低于正常食管组织的96.3%（26/27）和食管上皮内瘤变组织的54.55%（6/11），且差异有统计学意义（P＜0.05）；食管上皮内瘤变组织中CHFR蛋白阳性表达率也低于正常食管组织，且差异有统计学意义（P＜0.05）。高分化的食管癌组织中CHFR蛋白表达阳性率的33.33%（6/18）明显高于中-低分化的食管癌组织中CHFR蛋白表达阳性率的1.35%（1/74），差异具有统计学意义（P＜0.05）。患者的不同年龄、性别以及其他病理资料之间CHFR蛋白表达阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论食管癌中有丝分裂检查点基因CHFR蛋白的表达下调或缺失是频发、早期事件，可能参与食管癌的发生发展，其与食管癌分化程度的关系可能更为密切。

食管癌；CHFR；免疫组化

Oncol Prog，2016，14（7）

近年来，有丝分裂前期检查点基因CHFR的研究已成为肿瘤分子靶点研究的热点。CHFR在人正常组织中广泛表达，而在多种人肿瘤组织中表达下调［1］。许多研究显示，与正常细胞或组织相比，在肿瘤组织或细胞株中CHFR mRNA表达下调或缺失，CHFR启动子区5'端CpG岛超甲基化是表达下调的主要原因［2］。目前国内外关于食管癌中CHFR蛋白表达的研究较少，本研究使用免疫组化检测二步法，检测92例食管癌组织及与其相对应的11例食管黏膜上皮内瘤变与27例正常食管黏膜CHFR蛋白的表达。探索CHFR蛋白表达在食管癌早期诊断及临床病理学中的意义。

1　材料与方法

1.1试验材料

收集安徽省立医院2010年3月至2011年12月胸外科手术切除的食管癌标本92例以及相配对的食管上皮内瘤变11例，其中癌组织取自肿瘤组织的中心位置，另取正常人的食管组织27例，所有病例均经病理组织学检查证实。患者年龄40～78岁，其中≥60岁52例，＜60岁40例；男性83例，女性9例；组织病理类型：鳞状细胞癌89例，腺癌3例；分化程度：高分化18例，中分化59例，低分化15例；根据美国癌症联合委员会（AJCC）食管癌TNM分期：Ⅰ/Ⅱ期42例，Ⅲ/Ⅳ期50例；肿瘤浸润深度：T1/T2期19例，T3/T4期73例；无淋巴结转移N0期36例，有淋巴结转移N1期56例。

1.2试验方法

制作组织蜡块，将组织蜡块行2µm连续切片，采用GBI公司推出的免疫组化检测二步法检测92例食管癌与其对应的食管上皮内瘤变及正常食管组织中CHFR蛋白的表达。通过免疫组化半定量积分法判断免疫组化结果［3］。免疫组织化学结果由染色强度和染色频率两者来评估，0～1分为阴性，2～3分为阳性。

1.3统计学分析

采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。计数资料以率（%）表示，采用χ2检验或Fisher精确检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

图1　正常食管、食管癌、食管上皮内瘤变组织中CHFR蛋白免疫组化染色情况

2　结果

2.1CHFR蛋白在组织中的表达

食管癌组织中CHFR蛋白阳性表达率低于正常食管组织和食管上皮内瘤变组织，且差异有统计学意义（P＜0.05）；食管上皮内瘤变组织中CHFR蛋白阳性表达率也低于正常食管组织，且差异有统计学意义（P＜0.05），详见表1、图1。

表1　CHFR蛋白表达阳性率比较

2.2CHFR蛋白表达与食管癌患者临床病理资料的关系

高分化的食管癌组织中CHFR蛋白表达阳性率（33.33%）明显高于中-低分化食管癌组织中CHFR蛋白表达阳性率（1.35%），差异具有统计学意义（P＜0.01）；患者在不同年龄、性别以及其他病理资料间CHFR蛋白表达阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）。（表2、图1）

3　讨论

CHFR蛋白表达缺失与食管癌的发生关系密切，可能是食管黏膜癌变过程中的早期分子事件，先前学者的研究也支持本研究结果。有学者使用免疫组织化学法检测75例食管腺癌组织，发现75%（56/75）的食管腺癌组织CHFR蛋白表达缺失或减少；相反，100%（10/10）正常食管组织CHFR蛋白表达以及83%（5/6）与食管癌相对应的癌前病变Barrett食管中CHFR蛋白表达阳性［3］。尽管该学者认为病例数有限，未行统计学分析，但我们可以看到CHFR蛋白表达缺失与食管腺癌的发生关系密切，我们可扩大病例数进一步寻找两者之间的关系。

表2　CHFR蛋白表达与食管癌患者临床病理因素的关系

本组研究发现，在92例食管癌中，CHFR蛋白阳性表达率为7.61%，正常食管组织及食管上皮内瘤变组CHFR蛋白阳性表达率分别为96.30%（26/27）和54.55%（6/11），食管癌组CHFR蛋白的阳性表达率低于正常食管组织及食管上皮内瘤变组（P＜0.05），提示食管癌发生过程中CHFR蛋白表达下降，推测可能与CHFR基因缺失或突变有关，也可能在转录水平或转录后水平受到特异性调控而导致蛋白表达受到抑制。高分化的食管癌组织中CHFR蛋白表达阳性率为33.33%（6/18），中-低分化的食管癌组织中CHFR蛋白表达阳性率为1.35%（1/74），高分化的食管癌组织中CHFR蛋白表达阳性率明显高于中-低分化的食管癌组织中CHFR蛋白表达阳性率，差异具有统计学意义（P＜0.01），提示食管癌的分化程度越低，CHFR蛋白表达的下调越明显。但食管癌中CHFR蛋白的表达在患者不同性别、年龄、组织类型、TNM病理分期、肿瘤浸润深度及淋巴结转移等临床资料之间未见显著性差异（P＞0.05）。

在消化道肿瘤中，Hu等［4］运用免疫组织化学法检测了123例胃癌组织中CHFR蛋白的表达，结果发现52%（64/123）的胃癌组织CHFR表达阳性。分化好的胃癌组织中CHFR蛋白表达阳性率为70%（30/43），分化差的胃癌组织中CHFR蛋白表达阳性率为43%（34/80），两者之间具有显著统计学差异（P=0.004）。本实验的研究结果与Hu等研究结果基本一致，但Hu等研究结果显示为胃癌中CHFR蛋白表达阳性率明显高于食管癌中CHFR蛋白表达阳性率。原因考虑有以下两点：①CHFR蛋白的表达具有组织差异性，在消化道肿瘤CHFR基因启动子区超甲基化可能是CHFR蛋白表达缺失或减少的主要原因，Morioka等［5］研究显示原发性食管癌和胃癌中CHFR启动子区超甲基化率分别是24%（9/28）和30%（16/53）。②免疫组化结果的判定标准不一致，Hu等免疫组化结果的判断只是根据阳性细胞数百分比，阳性细胞数≥20%视为阳性，＜20%视为阴性。

在其他人肿瘤组织中，同样有文献报道CHFR蛋白表达下调或缺失。Privette等［6］同样使用免疫组化法检测了142例原发性浸润性乳腺癌，36% CHFR蛋白表达阴性，只有0.5%CHFR免疫组化染色呈强阳性。正常乳腺上皮细胞CHFR免疫组化染色明显呈阳性。免疫组化检测发现非小细胞肺癌中39%（62/157）CHFR蛋白表达下调，鳞癌中CHFR蛋白表达阳性率为22%，而肺腺癌中CHFR蛋白表达阳性率高达74%，两者之间差异具有显著统计学意义（P＜0.001）。另外非小细胞肺癌CHFR蛋白表达在高分化和中-低分化中分别为80%和51%（P=0.005）。此外，CHFR蛋白表达下调与吸烟相关性肺鳞癌和预后不良之间均具有显著统计学意义，多因素分析显示CHFR蛋白表达可作为肺癌的独立预后因素［7］。

4　小结

本研究通过运用免疫组织化学技术检测并阐述了食管癌及与其对应的食管上皮内瘤变、正常食管黏膜中有丝分裂前期检查点基因CHFR的蛋白表达之间的关系。研究发现：有丝分裂检查点基因CHFR在食管癌中蛋白的表达下调或缺失是频发事件，可能参与食管癌的发生，其与食管癌分化程度的关系可能更为密切。

［1］Scolnick DM，Halazonetis TD.Chfr defines a mitotic stress checkpoint that delays entry into metaphase［J］.Nature，2000，406（6794）:430-435.

［2］Summers MK，Bothos J，Halazonetis TD.The CHFR mitotic checkpoint protein delays cell cycle progression by excluding Cyclin B1 from the nucleus［J］.Oncogene，2005，24（16）:2589-2598.

［3］Delellis RA.Basic techniquesof immunochemistry，in Diag-nostic immunohistochemistry［M］.NewYork:Masson Publishing USA，1981:7-16.

［4］Hu SL，Huang DB，Sun YB，et al.Pathobiologic implications of methylation and expression status of Runx3 and CHFR genes in gastric cancer［J］.Med Oncol，2011，28（2）: 447-454.

［5］Morioka Y，Hibi K，Sakai M，et al.Aberrant methylation of the CHFR gene in digestive tract cancer［J］.Anticancer Res，2006，26（3A）:1791-1795.

［6］Privette LM，González ME，Ding L，et al.Altered expression of the early mitotic checkpoint protein，CHFR，in breast cancers:implications for tumor suppression［J］.Cancer Res，2007，67（13）:6064-6074.

［7］Takeshita1 M，Koga1 T，Takayama K，et al.CHFR expression is preferentially impaired in smoking-related squamous cell carcinoma of the lung，and the diminished expression significantly harms outcomes［J］.Int J Cancer，2008，123（7）:1623-1630.

Protein expression of CHFR gene in esophageal cancer and the pathological significance△

WU Shu-sheng1HE Yi-fu2SUN Yu-pei2JI Chu-shu2#
1Department of Medical Oncology，Western Section of Anhui Provincial Hospital，Hefei 230071，Anhui，China
2Department of Chemotherapy，Anhui Provincial Hospital，Hefei 230001，Anhui，China

ObjectiveTo observe the protein expression of CHFR prophase check point gene in esophageal cancer，esophageal intraepithelial neoplasia，and normal esophageal tissues，discuss the relationship between the protein expression of CHFR in esophageal cancer and clinicopathologic characteristics，and to explore the correlating molecular mechanism of CHFR expression in esophageal carcinogenesis and development.Method92 specimens of esophageal cancer，11 matched samples of esophageal intraepithelial neoplasia，and 27 samples of normal esophageal tissues were collected，in which the protein expression of CHFR were detected immunohistochemically.Semi-quantitative immunohistochemical analysiswasappliedtoevaluatetheimmunohistochemicalresults.ResultThepositiverateofCHFRproteinexpressionwas 7.61%（7/92）in esophageal cancers，and was significantly lower than that in normal esophageal tissues at 96.3%（26/27）and in esophageal intraepithelial neoplasia at 54.55%（6/11）（P＜0.05），respectively；And the positive expression of CHFR in esophageal intraepithelial neoplasia was also lower as compared with that in normal tissues（P＜0.05）；In well differentiated esophageal cancer tissues，the positive rate of CHFR protein expression was 33.33%（6/18），and was significantly higher than that in moderately or poorly differentiated esophageal cancers，with significant difference observed（P＜0.05）；No obvious correlation was observed between the CHFR protein expression and age，gender as well as other pathologic characteristics（P＞0.05）.ConclusionDown-regulation or absence of mitotic checkpoint CHFR protein expression is a frequent and early event，which may be involved in the esophageal carcinogenesis and is potentially yet closely related with the differentiation of esophageal cancers.

esophageal cancer；CHFR；immunohistochemisty

R735.1

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.07.15

2016-04-05）

安徽省科技计划项目（10021303022）

（corresponding author），邮箱：jichushu@csco.org.cn