m iRNA-221表达与甲状腺乳头状癌临床病理分期的关系研究△

刘志英 徐虓 吴英杰

新疆医科大学第五附属医院1病理科，2甲乳外科，3医务部质管科，乌鲁木齐830000

m iRNA-221表达与甲状腺乳头状癌临床病理分期的关系研究△

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新疆医科大学第五附属医院1病理科，2甲乳外科，3医务部质管科，乌鲁木齐830000

目的 探讨miRNA-221在甲状腺乳头状癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法 选取甲状腺乳头状癌（30例）、甲状腺良性病变（25例）及正常甲状腺组织（25例）共80例。采用real-time PCR法检测m iRNA-221在甲状腺乳头状癌组织、良性病变组织及正常甲状腺组织样本中的表达，并分析m iRNA-221的表达与甲状腺乳头状癌的临床病理特征的相关性。结果 m iRNA-221在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显高于甲状腺良性病变组织和正常甲状腺组织（P＜0.05）；miRNA-221的表达水平与甲状腺乳头状癌组织的病理分级具有明显的相关性（r=0.823，P＜0.05）。结论 m iRNA-221在甲状腺乳头状癌组织中表达升高，且与甲状腺乳头状癌的组织病理分级相关，m iRNA-221在甲状腺乳头状癌的发生发展中有重要作用。

miRNA-221；甲状腺乳头状癌；病理

M ircroRNA（m iRNA，m iR）是一种由17～25个碱基组成的单链非编码RNA，广泛存在于动物、植物体内。迄今已经在多种物种（包括果蝇、植物、人类等）中鉴别出超过3500种m iRNA分子。随着对m iRNA的深入研究，发现m iRNA通过调控细胞信号分子来调节细胞的增殖、分化和凋亡[3]。miRNA在多种肿瘤中的表达异常都与肿瘤的发生发展、侵袭转移及预后等密切相关。

miRNA-221是X染色体的相同基因簇编码，是由其编码基因转录生成的初级转录产物，在多种肿瘤中表达异常，如肝癌、甲状腺癌、白血病和恶性胶质瘤等[4]。本研究检测甲状腺乳头状癌患者的肿瘤组织中m iRNA-221的表达水平，分析其在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用，为甲状腺乳头状癌的早期诊断和预后提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取自2013年2月至2014年2月就诊新疆医科大学第五附属医院的甲状腺乳头状癌、甲状腺良性病变及正常甲状腺组织共80例。其中甲状腺乳头状癌30例，包括男11例，女19例，年龄22～65岁，平均（43.2±10.8）岁；甲状腺良性病变25例，其中男8例，女17例，年龄21～60岁，平均（40.2±11.1）岁；因咽喉部肿瘤手术切除的正常甲状腺组织25例，其中男11例，女14例，平均（41.8± 10.1）岁。甲状腺乳头状癌的分期按照2002年美国癌症联合会发布的标准[12]。手术中取样本后立即放入液氮中保存，然后转入－70℃冰箱长期保存。

1.2 方法

1.2.1 试剂 RNA提取试剂Trizo（linvitrogen公司）；DNA Marker、PCR试剂盒（晶美生物工程）；hsa-miRNA-221引物（RiboBio公司）；β-actin（Sigma公司）；real-time PCR system（Applied Biosystems公司）、real-time PCR试剂盒（TakaRa公司）。

1.2.2 总RNA的提取 将组织在液氮中磨碎，每50～100mg组织加入Trizol试剂1 m l充分混匀，提取组织中的总RNA。通过异丙醇沉淀浓缩RNA，使用分光光度计定量，使用1.5%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳测定RNA质量。将提取的RNA保存于－80℃冰箱中备用。

1.2.3 反转录反应 按照反转录试剂盒的说明进行操作，RNA的量为0.5μg，冰上加入以下试剂：总RNA 1μl，5×Prime Script Buffer 5 m l，Prime Script RT Enzyme M ix 1μl，stem-loop RT primer 2 μl，并加入DEPC水至总体积为20μl。然后将反应管置入PCR反应仪中，反应条件为42℃反应15 m in、85℃反应5 s、4℃反应15m in，产物在－80℃冰箱中保存备用。

1.2.4 real-time PCR PCR反应体系如下：miR-221扩增片段长73 bp，其上游引物为5'-CAGCATACATGATTCCTTGTGA-3'，下游引物为5'-CTTTGGTGTTTGAGA TGTTTGG-3'。real-time PCR MasterM ix 10μl，上游引物1μl，下游引物1μl，cDNA 2 μl，加DEPC水至20μl。将反应管置于real-time PCR反应仪中，反应条件为95℃预变性15min，再按95℃反应15 s，60℃反应1m in，扩增40个循环。实验重复3次。

1.3 统计学方法

所有实验数据采用SPSS17.0软件进行分析。m iRNA-221在甲状腺肿瘤组织及正常组织间的相对表达水平采用方差分析，采用Spearman等级相关分析m iRNA-221与临床病理的相关性，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 m iRNA-221在甲状腺乳头状癌组织中的表达

real-time PCR结果发现m iRNA-221在30例甲状腺乳头状癌患者中的表达为（12.26±2.21），在25例甲状腺良性病变组织中的表达为（2.16±1.14），在25例正常对照组中的表达为（1.07±0.83），三者差异具有统计学意义（P＜0.05）。m iRNA-221在甲状腺乳头状癌与良性病变组织中的表达差异具有统计学意义（P＜0.05）；甲状腺乳头状癌与正常对照组织中m iRNA-221的表达差异具有统计学意义（P＜0.05）；良性病变组织与正常组织比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 m iRNA-221的表达与甲状腺乳头状癌患者临床病理间的关系

根据miRNA-221的表达差异并结合患者的临床病理资料分析得出，m iRNA-221的表达情况主要与甲状腺乳头状癌的TNM分期有关，甲状腺乳头状癌分化程度越高，m iRNA-221的表达也越高，肿瘤的分化程度与m iRNA-221的表达呈正相关（r=0.823，P＜0.05），见表1。

表1 甲状腺乳头状癌分期与m iRNA-221表达水平的相关分析

3 讨论

甲状腺乳头状癌的发病率占全身恶性肿瘤的1%，占甲状腺结节的5%，但却是内分泌系统常见的恶性肿瘤。资料显示中国近20年来的甲状腺乳头状癌发病率呈逐年上升的趋势，由于其起病多而隐匿，不易发觉，因而早期诊断困难。近年来，随着对miRNA与肿瘤关系研究的深入，目前已有大量的与甲状腺乳头状癌相关的m iRNA被鉴定[5-6]。Pallante等[7]检测了m iRNA在甲状腺乳头状癌及正常甲状腺组织中的表达谱，发现m iRNA在二者中的表达谱明显不同，乳头状癌组织中m iRNA-221、m iRNA-222的表达明显高于正常组织。He等[8]通过m iRNA芯片检测20例甲状腺乳头癌组织和6例癌旁正常组织中m iRNA的表达，结果发现miRNA-221、m iRNA-222及miRNA-146在甲状腺乳头状癌中的表达较正常组织高10～19倍[9]，与本研究的结果基本一致。本组的研究表明，m iRNA-221在甲状腺乳头状癌患者中的表达高于甲状腺良性病变组织和正常组织，且具有明显差异；而甲状腺良性病变组织与正常组织中的m iRNA-221表达水平无明显差异。研究提示m iRNA-221可能与甲状腺乳头状癌细胞的增殖与分化有密切关系。

Yip等[10]研究通过RT-PCR法检测出在浸润性甲状腺乳头状癌中，m iR-221、m iR-146等多种因子的表达比在非浸润性甲状腺乳头状癌中的高，与本研究结果相似。本研究提示甲状腺乳头状癌TNM分期越高，m iRNA-221的表达与甲状腺乳头状癌的TNM分期呈正相关。表明m iRNA-221可能在甲状腺乳头状癌的发展及恶化过程中发挥重要作用[11]。

综上所述，m iRNA-221在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显增加，为甲状腺癌潜在的特征性分子事件，在甲状腺乳头状癌的发生发展中起重要作用，检测m iRNA-221对甲状腺乳头状癌患者的诊断和临床治疗具有一定的指导意义。

［1］李晓静,蒋玲,娄萍萍,等.甲状腺癌临床病理学特点的回顾性分析[J].中华内分泌代谢杂志,2013,29(12): 1010-1014.

［2］史琳,张安文,罗宁,等.细胞周期正性调控因子的异常表达与甲状腺癌发生发展的关系[J].南方医科大学学报,2013,33(7):1031-1035.

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［4］Dentelli P,Traversa M,Rosso A,etal.m iR-221/222 control luminal breast cancer tumor progression by regulating different targets[J].CellCycle,2014,13(11):1811-1826.

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［6］Yang Z,Yuan Z,Fan Y,et al.Integrated analyses ofm icroRNA andmRNA expression profiles in aggressive papillary thyroid carcinoma[J].Mol Med Rep,2013,8(5): 1353-1358.

［7］Pallante P,Battista S,Pierantoni GM,et al.Deregulation ofm icroRNA expression in thyroid neoplasias[J].NatRev Endocrinol,2014,10(2):88-101.

［8］He XX,Guo AY,Xu CR,et al.Bioinformatics analysis identifies m iR-221 as a core regulator in hepatocellular carcinoma and its silencing suppresses tumor properties [J].OncolRep,2014,2(3):1200-1210.

［9］Yip L,Kelly L,ShuaiY,etal.M icroRNA signature distinguishes the degree of aggressiveness of papillary thyroid carcinoma[J].Ann Surg Oncol,2011,18(7):2035-2041.

［10］Yip Linwah,Lindsey Kelly,Shuai Yongli,etal.M icroRNA signature distinguishes the degree of aggressiveness of papillary thyroid carcinoma[J].Ann Surg Oncol,2011, 18(7):2035-2041.

［11］DentelliP,Traversa M,Rosso A,etal.miR-221/222 control lum inal breast cancer tumor progression by regulating different targets[J].Cell Cycle,2014,13(11):1811-1826.

Theexpression ofm iR-221 in thyroid cancerand its relationshipw ith clincopathologicalstaging△

LIU Zhi-ying1XU Xiao2WU Ying-jie3#
1Departmentof Pathology,2Departmentof Thyroid and BreastSurgery,3MedicalDepartmentof Quality Control,the Fifth A ffiliated Hospitalof Xinjiang MedicalUniversity,Urumqi830000,Xinjiang,China

Objective To explore the m iRNA-221 expression in thyroid neoplasms and its clinical pathological features.Method A total of 80 cases of thyroid papillary carcinoma(30 cases),thyroid benign lesions(25 cases) and normal thyroid(25 cases)were included in this study.Real-time PCR was applied in detecting miRNA-221 expression in thyroid papillary carcinoma,benign lesions and normal thyroid tissue samples,besides,the correlation between m iRNA-221 expression and clinical pathological features of thyroid papillary carcinoma was analyzed.Result The real-time PCR showed that them iRNA-221 expression in thyroid papillary carcinoma tissue is significantly higher than that in either benign lesions or normal thyroid tissue(P＜0.05),and the expression levelwas significantly associated w ith pathological staging of thyroid papillary carcinoma(r=0.823,P＜0.05).Conclusion Them iRNA-221 expression is increased in thyroid papillary carcinoma tissues,and is correlated w ith the pathological staging of thyroid papillary carcinoma tissue,suggesting that the miRNA-221 is significantly engaged in the occurrence and development of thyroid papillary carcinoma.

m iRNA-221;thyroid papillary carcinoma;pathology

R736.1

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2015.13.05.17

Oncol Prog,2015,13(5)

甲状腺癌是头颈部最常见的肿瘤，也是常见 的内分泌恶性肿瘤之一，约占全身恶性肿瘤的1%。其发病率近年来有逐渐升高的趋势，特别是在2003年以后，每年以14.51%的速度增长，且发病年龄趋向年轻化。甲状腺癌按病理类型可分为：乳头状癌和滤泡状腺癌，其中乳头状癌占甲状腺癌的60%～70%。目前，甲状腺乳头状癌已经成为近20年来中国女性恶性肿瘤中发病率升高迅速的肿瘤之一[1]。甲状腺乳头状癌早期临床表现不明显，发病机制也不明确，其诊断及预后缺乏特异性的生物学指标，因此，引起了广大学者的深入研究[2]。

新疆医科大学第五附属医院院级科研基金（WFY 2014013）；新疆医科大学科研创新基金（校级，XJC201079）#

（corresponding author），e-mail：wyj9619@126.com

2015-04-29）