宫颈鳞状上皮内病变不同分级患者EGFR、p16蛋白、Ki67抗原表达水平及其临床意义

陆红梅，陈剑，荀生丽

1.扬州市妇幼保健院病理科，江苏扬州225002；2.扬州市妇幼保健院检验科，江苏扬州225002；3.扬州市妇幼保健院妇产科，江苏扬州225002

随着近年来宫颈癌的相关临床研究不断深入，已经发现宫颈癌是一个从感染人乳头状瘤病毒到宫颈上皮内病变直到演变为原发性宫颈癌发病的一个连续发展的过程[1-2]。其中宫颈鳞状上皮内的正常结构改变与细胞的异型增生为低级、高级别宫颈上皮内病变的主要特征，也是出现宫颈鳞状上皮的癌前的一种特异性病变。有少数文献指出，通过给予适当的治疗能够有效抑制低级别宫颈皮内病变（LSIL）的进展且有较高的消退率，而对于高级别宫颈上皮内病变（HSIL）患者而言很难通过临床治疗达到使其发生出现逆转的情况，因此高级别宫颈上皮内病变发展为宫颈癌的可能性较大[3]。临床准确的对宫颈上皮内病变分级进行诊断，对于改善患者的预后有着较为重要的意义。故选择2016年1月—2019年12月在该院首次进行宫颈活检手术的石蜡包埋组织240例，研究EGFR、p16蛋白、Ki67抗原表达水平临床意义及与不同病理类型宫颈组织的相关性。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择该院首次进行宫颈活检手术的石蜡包埋组织，参照宫颈上皮内病变WHO分级标准（2014年）作为宫颈肿瘤组织学分类标准。所选患者经伦理委员会通过，且患者或家属知情并同意。排除标准：①有放化疗史的患者；②有免疫治疗史的患者；③有子宫疾病史的患者。其中宫颈鳞状上皮化生、HSIL、LSIL各80例。80例宫颈鳞状上皮化生患者，年龄24~70岁，平均（41.97±7.21）岁；80例LSIL患者，年龄27~68岁，平均（36.27±6.45）岁；80例HSIL患者，年龄26~69岁，平均（42.04±7.26）岁。3组一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

选择福尔马林对标本进行固定，脱水后用石蜡进行包埋，切片机将标本切片到4μm，SP法进行免疫组化染色，选择鼠抗人EGFR单克隆抗体对EGFR进行标记，选择鼠抗人p16单克隆抗体进行p1标记，选择鼠抗人Ki67抗原单克隆抗体进行Ki67抗原标记。选择福州迈新生物公司的试剂盒，阳性对照为已知阳性切片，选择磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗为阴性对照。

1.3 观察指标

EGFR在细胞浆或细胞膜中进行定位，p16在细胞核和/或胞浆定位，Ki67抗原在细胞核中定位，光镜下观察到棕黄色则为阳性细胞,阳性细胞数<5%或无阳性细胞为阴性。阳性细胞数≥5%属于阳性，同时将阳性组织分为3个等级：5%~25%为(+)；25%~50%为(++)；>50%为(+++)。

1.4 统计方法

采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，计量资料用（±s）表示，组间比较采用独立样本t检验或F检验；计数资料采用[n(%)]表示，组间比较采用χ2检验，选择Pearson相关分析方法对EGFR、Ki67抗原和p16蛋白在不同病理类型宫颈组织之间表达的相关性进行分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各级患者EGFR、Ki67抗原和p16蛋白的表达

各级患者EGFR、Ki67抗原和p16蛋白表达差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 各级患者EGFR、Ki67抗原和p16蛋白的表达

2.2 LSIL和HSIL组中EGFR、Ki67抗原和P16蛋白的阳性分布

HSIL中EGFR、Ki67抗原、p16蛋白的阳性分布与LSIL患者差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 LSIL和HSIL组中EGFR、Ki67抗原和p16蛋白的阳性分布（例）

2 .3 EGFR、Ki67抗原和p16蛋白在3组中表达的相关性

鳞状上皮化生与LSIL中EGFR、Ki67抗原和p16蛋白比较，均无明显相关性（r=0.14、0.29、0.20，P＞0.05）；鳞状上皮化生与HSIL中EGFR、Ki67抗原和p16蛋白比较，均无明显相关性（r=0.11、0.17、0.15，P＞0.05）；但LSIL与HSIL中EGFR、Ki67抗原和p16蛋白比较，均呈正相关（r=0.38、0.40、0.43，P<0.05）。

3 讨论

宫颈癌发病的主要致病因素之一是感染人乳头状瘤病毒[4-5]。人乳头状瘤病毒的E6、E7基因可能会对宿主的基因组进行整合，导致P53、Rb等蛋白出现表达异常的情况，进而引发Ki67抗原、p16蛋白的表达出现异常[6]。有研究指出，p16基因通过突变与缺失来参与肿瘤的形成，能直接参与调控细胞周期,对细胞的分裂与增殖有负调节作用，p16基因的失活可能会导致恶性增殖的发生[7-8]。Ki67抗原属于一种核增殖的抗体，多在除GO期以外细胞周期的细胞中进行表达，能作为标记细胞增物，可用于鉴别反应性增生病变与肿瘤。EGFR与受体结合能够加速细胞的增殖分化，增加细胞的恶性转化，这与肿瘤的组织学分型有着较为密切的联系，已在临床诊断乳腺癌、胃癌中被广泛应用[9-10]。

该次研究显示，各级病变中Ki67、p16和EGFR表达存在明显差异，鳞状上皮化生患者阳性率最低，HSIL患者最高，达96.25%、97.50%、73.75%，靳情等[11]等对120例各级宫颈病变研究也发现，HSIL患者中Ki67、p16表达高于LSIL、正常患者，达93.3%、91.7%，与该研究发现基本一致。提示Ki67抗原、p16蛋白、EGFR的表达与宫颈癌的病变程度有着较为密切的联系，阳性数随病情的发展而随之增加。相关性分析结果显示，在HSIL和LSIL患者中ECFR、Ki67抗原和p16蛋白比较，均呈正相关。同时阳性细胞分布规律发现，LSIL中Ki67、p16和EGFR主要分布于基底层，HSIL中则主要分布在上皮下2/3层以上且呈现弥漫性分布。石克等[12]在122例HSIL和LSIL患者研究中也发现，LSIL阳性细胞主要于宫颈鳞状上皮的下1/3着色，HSIL于上皮中下2/3层或全层，与该文结果相似。由此提示，HSIL和LSIL患者Ki67、p16和EGFR阳性细胞具有明显分布差异。

综上所述，免疫组化SP法对ECFR、Ki67抗原和p16蛋白进行标记能够作为SIL分级的依据,结合LSIL和HSIL的分布特征，能够有效提高诊断的准确率。