Rsf-1、TOP2A在胃癌和癌前病变组织中的表达及意义

胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤，在中国其发病率和病死率均较高[1]。胃癌的发生发展与多种因素(包括环境因素、幽门螺杆菌感染、饮食习惯、遗传因素等)密切相关，且疗效及预后与肿瘤的转移、浸润密切相关[2]。胃癌的发生并不是由正常胃黏膜细胞直接转变为肿瘤细胞的，而是一个多因素参与、多步骤癌变的过程[3]。拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)又称旋转酶，参与了机体内基因复制、细胞增殖等过程[4]。研究显示，TOP2A在乳腺癌等多种肿瘤中呈高表达，且与肿瘤的恶性程度呈正相关[5]。染色质重塑因子1(Rsf-1)位于11q13.5扩增基因，该位置包含EMSY、PAK1、CCND1及Rsf-1等多个候选致癌基因。既往研究显示，Rsf-1在头颈部、消化系统及泌尿系统肿瘤组织中高表达，且与患者肿瘤的恶性程度、治疗耐药性及预后不良等关系密切[6-7]。目前有关Rsf-1、TOP2A在胃癌中的研究报道较少，本文观察了其在胃癌及癌前病变组织中的表达，探讨其在胃癌发生、发展机制中的作用，旨在为临床诊治、判断预后提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集湖北省肿瘤医院于2015年3月至2018年10月间存档的胃组织标本，包括33例慢性萎缩性胃炎、31例肠上皮化生、35例异型增生，另选择同期在本院行手术切除并经病理证实的55例胃癌组织及癌旁组织(距肿瘤组织>5 cm)标本。55例胃癌组织标本中，男性36例，女性19例，平均年龄(58.67±11.32)岁；33例慢性萎缩性胃炎组织标本中，男性22例，女性11例，平均年龄(58.12±10.69)岁；31例肠上皮化生组织标本中，男性20例，女性11例，平均年龄(57.96±11.34)岁；35例异型增生组织标本中，男性23例，女性12例，平均年龄(58.36±11.47)岁。各组受试者的年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。所有患者术前均未接受放射、化学治疗，临床资料完整。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求，并经本院伦理委员会核准。

1.2 方法

采用免疫组织化学法检测慢性萎缩性胃炎组织标本、肠上皮化生组织标本、异型增生组织标本及胃癌组织标本和配对癌旁组织标本中的Rsf-1蛋白、TOP2A的表达情况。所有标本采用4 %甲醇溶液固定，石蜡包埋，连续切片，厚度为4 μm。采用Histostain-Plus试剂盒(购自上海起福生物科技有限公司)参照说明书步骤进行切片的免疫组织化学染色。由本院2位资深病理科医师在显微镜下对染色切片进行双盲观察。

1.3 观察指标及判定标准

观察记录各组标本的Rsf-1蛋白、TOP2A表达阳性率，并分析各组标本之间阳性率的差异，以及胃癌组织标本的阳性率与临床病理参数间的关系。

Rsf-1蛋白、TOP2A阳性判断依据着色强度和阳性细胞率。着色强度评分：未染色计0分，浅黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分。对3个典型区域进行高倍(400倍)视野观察，计数150～200个细胞，阳性细胞率≤5%计0分，5%<阳性细胞率≤25%计1分，25%<阳性细胞率≤50%计2分，50%<阳性细胞率≤75%计3分，75%<阳性细胞率≤100%计4分。阳性细胞率评分×着色强度评分<3分为阴性，≥3分为阳性。

1.4 统计学分析

本研究采用SPSS 19.0软件进行数据分析。计数资料以例(%)表示，行卡方检验。各临床指标间的关系进行Spearman相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Rsf-1蛋白、TOP2A在各组中的表达

与胃癌组织相比较，癌旁组织、慢性萎缩性胃炎组织、肠上皮化生组织、异型增生组织的Rsf-1蛋白、TOP2A阳性率明显降低；与癌旁组织相比较，肠上皮化生组织、异型增生组织中的Rsf-1蛋白、TOP2A阳性率均明显升高；慢性萎缩性胃炎组织、癌旁组织的Rsf-1蛋白、TOP2A阳性率均低于异型增生组织，上述差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表1。

2.2 Rsf-1蛋白、TOP2A在胃癌组织中的表达与临床病理参数之间的关系

胃癌组织中Rsf-1蛋白、TOP2A阳性率均与患者淋巴结转移相关(χ2=7.090，P=0.008；χ2=5.960，P=0.015)，而与患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度及TNM分期无明显关系(P>0.05)。详见表2。

表1 Rsf-1蛋白、TOP2A在各组中阳性表达比较[例(%)]

注：与胃癌组织相比，aP<0.05；与癌旁组织相比，bP<0.05；与异型增生组织相比，cP<0.05

表2 Rsf-1蛋白、TOP2A在胃癌中的表达与临床病理参数之间的关系/例(%)

续表2 Rsf-1蛋白、TOP2A在胃癌中的表达与临床病理参数之间的关系/例(%)

2.3 Rsf-1蛋白、TOP2A在胃癌组织中的表达相关性及其与淋巴结转移的关系

经Spearman相关分析显示，Rsf-1蛋白、TOP2A在胃癌组织中的表达呈正相关(r=0.379，P<0.05)；Rsf-1蛋白、TOP2A在胃癌组织中的共阳性表达与患者淋巴结转移有关(χ2=7.689，P<0.05)。

3 讨论

肿瘤的发生、发展是一个涉及多种因素、多个步骤的复杂过程，多数学者认为癌前病变(浅表性胃炎→萎缩性胃炎→肠上皮化生→异型增生→胃癌)是胃癌发生、进展的重要机制之一[8]。分子学机制包括抑癌基因失活、致癌基因激活等，使细胞增殖失控，肿瘤细胞侵袭转移，进而导致恶性转化。鉴于胃癌的发生、发展机制，本研究比较了慢性萎缩性胃炎组织、肠上皮化生组织、异型增生组织、胃癌组织及癌旁组织中的Rsf-1蛋白、TOP2A表达水平，旨在为临床诊治提供参考。

Rsf-1位于细胞核内，是常见的扩增基因之一，可与人类蔗糖性非发酵蛋白2同源体(hSNF2H)相互作用，使细胞在基因生长信号和环境方面的调控异常而发生异常增生，导致肿瘤的发生。研究发现，Rsf-1在多种消化道肿瘤组织中高表达，且与患者预后不良关系密切[9]。本研究结果显示，胃癌组织中的Rsf-1表达阳性率为72.73%，明显高于癌旁组织，且在异型增生组织、肠上皮化生组织及慢性萎缩性胃炎组织中表达水平依次降低。提示Rsf-1可能参与了胃癌的发生、进展，且在此过程中扮演致癌基因的角色。本研究分析了Rsf-1与临床病理参数间的关系，发现Rsf-1阳性表达与患者淋巴结转移关系密切(P<0.05)。但有研究报道，Rsf-1的阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期及分化程度均有关[10]。本研究结果与上述文献类似，但又不完全一致，考虑可能与本研究的分组及样本量偏少有关。

DNA拓扑异构酶在正常、异常细胞中均广泛分布，具有核糖酸空间结构调节作用，且是实现核糖酸生理功能的关键酶。TOP2A是DNA拓扑异构酶的重要类型，分布于第17号染色体上，可通过控制DNA拓扑结构，在DNA的转录和复制中发挥重要作用。研究发现，在乳腺导管癌中TOP2A基因异常发生率为20.49%，且与患者肿瘤组织分级、直径有关[11]。另有研究指出，TOP2A是影响胃癌患者总生存期的独立危险因素，且其表达水平随表柔比星治疗效果的提升而降低[12]。本研究结果显示，胃癌组织中的TOP2A蛋白表达阳性率为67.27%，明显高于癌旁组织，而在异型增生组织、肠上皮化生组织及慢性萎缩性胃炎组织中的表达水平依次降低，且TOP2A蛋白阳性表达与患者淋巴结转移关系密切(P<0.05)。这与林陈石[13]的研究结果相似，但该研究发现TOP2A蛋白的表达水平与性别有关，与本研究结果并不一致，这可能与研究纳入条件(该研究为胃腺癌)不同有关。此外，本研究发现Rsf-1与TOP2A蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关，与既往研究结果基本一致[14-15]。

综上所述，Rsf-1、TOP2A蛋白在胃癌组织中表达升高，高于癌旁组织和癌前病变组织，且与胃癌患者的淋巴结转移密切相关，对其检测有利于对肿瘤的发生发展及转移进行评估，从而指导临床诊治。

本研究的局限性在于仅为单中心回顾性研究，样本例数偏少，未能随访观察不同Rsf-1、TOP2A蛋白表达水平患者的预后，这为后续研究指明了方向。