骨桥蛋白在寻常型银屑病中的表达及临床意义＊

金 汶， 胡 翠， 汪方玲， 刘 随， 沈 艳， 刘 斌

1湖北省随州市中心医院皮肤科，随州 441300

2华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科，武汉 430022

3苏州儿童医院皮肤科，苏州 215000

银屑病（psoriasis）是一种慢性炎症性皮肤病，其发病机制尚不清楚。目前学者普遍认为，银屑病是一种T细胞介导的免疫相关的炎症性疾病。研究显示银屑病患者体内普遍存在“Th1偏倚”现象，主要与Th1型细胞因子有关。在银屑病发病危险因素的调查研究中显示，银屑病与遗传因素、环境因素、精神因素、饮酒、代谢综合征等有密切关系［1－2］。

骨桥蛋白（osteopontin，OPN）［3］是一种新近发现的与细胞外基质蛋白同源的促炎细胞因子，包含RGD（Arg－Gly－Asp）序列，属于 Thl型细胞因子。有研究认为，OPN是免疫细胞募集及启动Th1型细胞免疫的关键细胞因子［4］，可诱导Thl型细胞因子的产生，抑制Th2型细胞因子的表达，从而在Thl／Th2失衡性疾病的发病中起作用［5］。

本研究旨在观察寻常型银屑病患者皮损及外周血中OPN的表达情况，并分析OPN表达与银屑病患者临床参数及危险因素的相关性，探讨其在银屑病发病中的作用以及在临床诊断治疗和预后判断中的可能意义。

1 材料与方法

1．1 标本来源

1．1．1 病理标本 收集随州市中心医院和武汉协和医院皮肤科病理室2009～2010年寻常型银屑病病例标本15例，其中男性9例，女性6例，年龄在25～57岁之间，病程1个月到11年。对照组标本为正常皮肤组织，共10例，男性4例，女性6例，年龄在23～49岁之间，来源于整形外科和皮肤科。

1．1．2 血清标本 用EDTA抗凝管收集银屑病组及对照组全血3～5mL，8h内于4℃低温离心（2 000r／min，10min），取血清于－80℃保存。银屑病组来自随州市中心医院2012年1月至2013年2月寻常型银屑病住院患者入院时抽取的肘静脉血，共55例，其中男性30例，女性25例，平均年龄（36．22±12．97）岁，病程0～26年，平均（5．13±5．42）年。对照组为健康体检者，共40例，其中男性24例，女性16例，平均年龄（38．98±12．8）岁。两组的年龄和性别均具有可比性。

1．2 方法

1．2．1 银屑病皮损面积和严重度指数（psoriasis area and severity index，PASI）评分 对55例血清标本对应的银屑病患者进行PASI评分［6］。PASI评分＝（E头＋I头＋D头）×A头×0．1＋（E上肢＋I上肢＋D上肢）×A上肢×0．2＋（E躯干＋I躯干＋D躯干）×A躯干×0．3＋（E下肢＋I下肢＋D下肢）×A下肢×0．4，A：皮损面积，E：红斑，I：浸润，D：脱屑。

1．2．2 临床资料 收集1．1．2中所有患者的临床资料。

1．2．3 实验试剂与仪器 OPN（SPP1）兔抗人多克隆抗体 （EPITOMICS 公 司，货 号 2671－1s），OPN ELISA试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司，货号：EK0482），全自动酶标仪（美国 TENCAN公司）。

1．2．4 OPN的检测 皮损中OPN的检测采用免疫组化SP法，评分标准：以镜下见胞质、胞核内出现黄色、棕色及棕黄色颗粒为阳性染色。根据阳性细胞的百分比及染色强度进行综合评分。①阳性百分比：每张切片必须在高倍镜下（×400）由2个不同的观察者随机观察5个视野，计算5个视野的阳性细胞百分比平均值。阳性细胞百分比评分有以下5个等级：无阳性（0分），0～25%阳性（1分），26%～50%阳性（2分），51%～75%阳性（3分），≥76%阳性（4分）。②染色强度评分分为以下4个等级：无染色（－，0分），弱阳性（黄色＋，1分），中度阳性（棕黄色⧺，2分），强阳性（棕褐色⧻，3分）。综合评分：两项相加结果为综合评分：阴性0分，弱阳性（＋）1～3分，中度阳性（⧺）4～5分，强阳性（⧻）6～7分。血清标本中的OPN检测采用ELISA法。

1．3 统计学方法

所有实验数据用SPSS18．0统计软件进行统计学分析，计量资料以±s表示，比较用t检验，计数资料比较用卡方检验，OPN水平与PASI评分的相关性用Pearson相关分析，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 免疫组化法检测OPN在皮肤组织中的表达

OPN在正常皮肤的基底层有少量表达；在银屑病皮损的角质细胞、棘层和基底层细胞均有表达，在部分血管内皮细胞也有表达（图1）。寻常型银屑病皮损组织中OPN的表达阳性率明显高于正常皮肤对照组（χ2＝10．98，P＜0．05），差异具有统计学意义，见表1。

图1 OPN在银屑病皮损和正常皮肤组织中的表达（免疫组化SP法）Fig．1 Expression of OPN in psoriasic lesions and normal skins（immunohistochemistry SP method）

表1 OPN在银屑病组及对照组皮肤中表达的比较Table 1 Comparison of the expression of OPN in psoriasic lesions and normal skins

2．2 ELISA法检测OPN在血清中的表达

银屑病组血清中 OPN的浓度为（11．562±1．873）ng／mL，明显高于对照组（3．882±2．427）ng／mL，差 异 具 有 统 计 学 意 义 （t＝16．72，P＜0．05）。

2．3 血清OPN与银屑病组临床参数的相关性分析

银屑病组血清中OPN的表达水平与PASI评分呈正相关（r＝0．528，P＜0．05），与空腹血糖、总胆固醇无显著相关性（r值分别为0．249、0．170，P＞0．05）。见图2。

图2 银屑病组血清OPN的表达水平与PASI评分呈正相关Fig．2 Positive correlation between PASI and OPN expression in experimental group

2．4 银屑病患者按相关危险因素重新分组后血清OPN的比较

BMI超重组 OPN 的 表 达 水 平 （12．263±0．692）ng／mL 显 著 高 于 BMI正 常 组 （11．343±2．067）ng／mL，差异具有统计学意义（P＜0．05）。而在吸烟、饮酒、高血压、血脂方面未见显著差异（P＞0．05）。见表2。

表2 银屑病患者按危险因素分组后比较血清OPN的表达（±s）Table 2 Comparison of the serum level of OPN in psoriasis patients grouped by risk factors（±s）

表2 银屑病患者按危险因素分组后比较血清OPN的表达（±s）Table 2 Comparison of the serum level of OPN in psoriasis patients grouped by risk factors（±s）

分组因素 OPN P值吸烟是11．637±1．786 0．903饮酒是11．964±1．473否11．709±1．880否11．575±0．867 0．524高血压是12．303±0．209否11．588±1．865 0．399 BMI正常 11．343±2．067超重 12．263±0．692 0．016血脂正常 11．819±1．702增高 11．165±2．0120．241

3 讨论

银屑病是一种免疫相关的慢性炎症性皮肤病，T细胞、巨噬细胞、角质形成细胞、血管内皮细胞等均参与了银屑病的发病过程。OPN是一种早期的T细胞活化因子，主要表达于巨噬细胞、活化的T细胞、上皮细胞、内皮细胞、平滑肌细胞等。OPN是Th1型细胞因子，具有Th1细胞因子功能［7］，不仅在Th1／Th2极化的调节中起重要作用，还是参与免疫细胞募集，是Th1细胞免疫启动的关键因子。有研究显示，OPN可通过差异性调节巨噬细胞IL－12和IL－10的表达，而产生有效的Ⅰ型免疫反应［8］。近年来，Chen等［9］研究证实血清中OPN水平的高表达与银屑病、高血压、糖尿病等显著相关，且是银屑病患者出现心血管疾病的不利因素之一。

本研究显示，OPN在银屑病组皮损中的表达明显高于对照组，OPN在银屑病患者血清中的表达水平也显著高于正常对照组，结果与Chen等［9］及Buommino等［10］的报道一致。此外，本研究还显示银屑病患者血清OPN表达水平与PASI评分呈正相关。OPN能促进CD4＋T细胞释放炎症因子，还能促进 血 管 内 皮 细 胞 增 殖［11－12］。Allan 等［13］发 现OPN能通过逃避免疫监视、阻止补体介导的细胞凋亡来阻碍癌细胞凋亡，促进肿瘤发展。银屑病的主要病理表现为角质细胞过度增殖，炎症细胞浸润及新生血管形成，与肿瘤过度增殖类似。因此从这些结果我们推测，OPN可能参与了银屑病的发病，其表达水平一定程度上可反映银屑病的严重程度，为OPN作为评估银屑病严重程度的指标提供了依据。

本研究将银屑病患者按照危险因素分组比较，在吸烟、饮酒、高血压、血脂增高等合并危险因素方面未见显著差异，但BMI超重组OPN表达水平显著高于BMI正常组。BMI升高是肥胖的一个重要特征，我们推断肥胖可能是银屑病患者OPN高表达的影响因素之一。

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