驴乳和牛乳对免疫抑制小鼠免疫功能调节的比较研究

谢 璐 宋玲玲 江春雨,2*

(1塔里木大学动物科学学院， 新疆 阿拉尔843300)(2 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室， 新疆 阿拉尔843300)



驴乳和牛乳对免疫抑制小鼠免疫功能调节的比较研究

谢 璐1宋玲玲1江春雨1,2*

(1塔里木大学动物科学学院， 新疆 阿拉尔843300)(2 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室， 新疆 阿拉尔843300)

本文比较了驴乳和牛乳对氢化可的松所致的免疫抑制小鼠免疫功能调节的影响。结果表明，驴乳和牛乳均能改变免疫抑制小鼠脾脏和胸腺指数、白细胞数，TNOS(总一氧化氮合酶)和iNOS(诱导型一氧化氮合酶)的活性。驴乳和牛乳对机体的正常组织细胞能起到保护作用，并增强小鼠的免疫力，而且在同等剂量下，驴乳的增强效果优于牛乳。

驴乳； 牛乳； 免疫抑制； 功能调节

驴乳的化学成分与人乳比较接近，具有低胆固醇和低脂肪的特点。驴乳不仅营养价值高，对人体的心、肝、脾、肺等多种器官还有保健作用。除强身健体之外，还有一定的药用价值，对肺结核、气喘、胃炎等起到一定的辅助疗效作用，受到食品界及乳品界的广泛关注[1]。牛乳也是人们日常生活中喜欢食用的不可缺少的营养品，有较好的保健和医疗价值。牛奶为完全蛋白质食品，对脑髓和神经的形成及发育有重要作用。有临床研究证实牛奶可辅助治疗消化性溃疡，还能增强人体的抗癌和抗病能力[2，3]。目前驴乳和牛乳对免疫抑制小鼠免疫功能的比较研究未见报道。本研究将驴乳和牛乳分别作用于免疫抑制小鼠，比较二者对免疫抑制小鼠免疫器官重量、白细胞数及血清中TNOS和iNOS的活性的影响，以期为进一步研究药食两用的乳品提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 健康昆明种小鼠，雌雄各半，体重20～22 g，许可证号SCXK( 新) 2003-0001，由塔里木大学动物科学学院动物实验站提供。普通饲料喂养，饲养温度20～22 ℃。

1.1.2 药品与仪器

驴乳购于喀什岳普湖县“疆岳驴”良种繁育基地，牛乳为市售的新鲜牛乳，NOS测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)，氢化可的松(国药集团化学试剂有限公司),723型可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)，低速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.2 实验方法

1.2.1 实验动物处理

新鲜的驴乳和牛乳分别煮沸10 min，自然冷却后备用。将小鼠随机分成4组, 每组10 只, 其中免疫抑制模型对照组、驴乳组及牛乳组在试验第 1、3、5、7 d 皮下注射0.35%的氢化可的松溶液(0. 20 ml/10g)，造成免疫抑制，驴乳组每天灌服驴乳 (0. 20 ml/10g),牛乳组每天灌服牛乳(0. 20 ml/10g),模型对照组灌服等量的生理盐水，正常对照组皮下注射、灌服的均为等体积的生理盐水,试验时间为10天。

1.2.2 测定指标及方法

第10天给药1小时后, 先称取所有小鼠的重量，再于小鼠尾静脉采血20 μL，按照常规的方法计算白细胞的总数。用消毒剪快速剪去小鼠头颈部，倒立小鼠让血液滴入离心管中，静置待自然凝固，2000 r/min离心10 min后分离出血清，迅速采用化学比色法测定鼠血清总一氧化氮合酶(TNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活力[4]，测定步骤均按照南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明书进行操作[5]。迅速用消毒剪刀剪开处死后的小鼠腹部皮肤，暴露出腹膜，并用酒精棉擦拭腹膜进行消毒。迅速取出小鼠的胸腺和脾脏，分别称重，用以计算脏/体比(脏器质量mg/体质量g)。

1.3 数据统计分析

2 结果

表1 驴乳和牛乳对免疫抑制小鼠外周血白细胞数的影响

注: 与模型对照组比较，**P<0. 01，差异极显著;*P<0. 05，差异显著；驴乳与牛乳组比较, ΔP<0. 05，差异显著。

由表1可知，免疫抑制小鼠的白细胞数减少。与免疫抑制模型组比较，驴乳组和牛乳组的白细胞数升高，差异极显著(p<0. 01)。可见驴乳和牛乳对氢化可的松所致的外周血白细胞减少, 都有非常明显的保护作用。驴乳组与牛乳组比较，差异显著(P<0. 05)。

2.2 驴乳和牛乳对免疫抑制小鼠脏/体比的影响

表2 驴乳和牛乳对免疫抑制小鼠免疫器官重量的影响

注: 与模型对照组比较，**P<0. 01，差异极显著;*P<0. 05，差异显著；驴乳与牛乳组比较, ΔP<0. 05，差异显著。

由表2可知，与对照组相比，免疫抑制模型组小鼠的脾/体比和胸腺/体比显著降低，与模型组相比，驴乳和牛乳均可提高免疫抑制小鼠胸腺/体比，差异显著，驴乳组与牛乳组比较，差异显著(P<0. 05)。驴乳和牛乳均提高免疫抑制小鼠脾/体比，且差异极显著。说明驴乳和牛乳对小鼠免疫器官的发育有一定的影响。

2.3 驴乳和牛乳对免疫抑制小鼠血清TNOS和iNOS活性的影响

表3 驴乳和牛乳对免疫抑制小鼠血清TNOS和iNOS活性的影响

注: 与模型对照组比较，**P<0. 01，差异极显著;*P<0. 05，差异显著；驴乳与牛乳组比较, ΔP<0. 01，差异极显著。

由表3可知，与模型对照组相比，驴乳组和牛乳组的免疫抑制小鼠血清中TNOS和iNOS活性均明显降低。其中，iNOS活性显著低于模型对照组(P<0. 05)，TNOS活性极显著低于模型对照组(P<0. 01)。驴乳组与牛乳组间有极显著性差异(P<0. 01)。

3 讨论

本实验采用氢化可的松复制小鼠免疫抑制模型，与正常对照组相比较，模型组的小鼠白细胞数减少，胸腺和脾脏指数显著降低，反映其免疫功能受到了损伤，表明免疫抑制模型复制成功。近来研究表明，在同等条件下氢化可的松可复制出比环磷酰胺更稳定、更典型、更理想的免疫抑制小鼠模型[6]。白细胞是血液参与机体免疫功能的主要成分, 参与机体重要的免疫功能。在循环血液中白细胞的数量始终处于动态平衡状态，白细胞数量的变化会影响机体的免疫能力；胸腺与脾脏是机体主要的免疫器官，胸腺是T淋巴细胞分化成熟的中枢免疫器官, 脾脏则是体内最重要的外周免疫器官,它们与体液免疫和细胞免疫均有密切的关系，胸腺和脾脏指数的变化也是评定免疫机能的重要指标之一。有研究表明，动物体内外的一些活性物质均能通过NO来调节动物免疫防御。NO是一种神经递质，但是大剂量会损伤正常的细胞[7]。而NO的作用依赖于NOS的活性，所以测定NOS的活性是研究NO病理作用的重要环节。NOS包括神经型NOS(nNOS)、内皮型NOS(eNOS)以及在损伤后诱导表达的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)三种类型[8，9]。受内毒素及细胞因子刺激时，iNOS激活持续产生大量的NO，发挥细胞毒性作用[5]。综上所述，本研究采用外周血白细胞数、胸腺和脾脏指数、血清TNOS和iNOS活性为评价指标，比较驴乳和牛乳对免疫抑制小鼠的免疫调节功能，结果显示驴乳和牛乳均能使免疫抑制小鼠的白细胞数升高，胸腺和脾脏指数增大，血清中TNOS和iNOS的活性降低，从而对机体的正常组织细胞起到保护作用，并进一步增强小鼠的免疫力，而且驴乳的增强效果优于牛乳。本研究为进一步开发驴乳的药用价值和深入研究其作用机制提供了依据。

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[4] 沙爱龙,杨雪萍,王伟,等.硬枝碱蓬多糖对免疫抑制小鼠血清中NO含量及NOS活性的影响[J].四川动物,2013,32(01):90-92.

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A Comparative Study on Effects of the Donkey Milk and Milk to Immunosuppressive Mice Immune Function Regulation

Xie Lu1Song Lingling1Jiang Chunyu1,2*

(1 College of Animal Science，Tarim University，Alar,Xingjing 843300)

(2 Key Laboratory of Animal Husbandry Science and Technology, Xinjiang Production and Construction Corps, Alar, Xinjiang 843300)

This article compared the donkey milk and milk on the immune function regulation of immunosuppressive mice caused by hydrocortisone. The results showed that donkey milk and milk could alter spleen and thymus index and Peripheral blood leukocytes of immunosuppressive mice, TNOS (total nitric oxide synthase) and iNOS(inducible nitric oxide synthase ) activity, Donkey milk and milk had protective effect to the cells of the body's normal tissue, and strengthening the immune system of mice, and in the same dose, enhancement effect of donkey milk was better than milk.

Donkey milk；milk；immunosuppression; function regulation

2014-10-25

塔里木大学校长基金项目(TDZKSS201407)；大学生创新训练计划项目(DKY2013004)。

谢璐(1993-)，女，本科生，研究方向为动物医学。 E-mail: taoyaerxl@163.com

E-mail:jcydky@126.com

1009-0568(2015)02-0112-04

S852

A

10.3969/j.issn.1009-0568.2015.02.021