保肺汤对慢性阻塞性肺病患者肠道菌群的影响

吴冠仪 何绿苑 林文波 黄沆 赵晨充

慢性阻塞性肺病（COPD）是一种具有气流阻塞特征的慢性支气管炎和（或）肺气肿，可进一步发展为肺心病和呼吸衰竭，与气道和肺脏对有毒颗粒或气体的慢性炎性反应增强有关。现代越来越多的研究发现COPD的慢性炎症反应与肠道密切相关，存在“肺-肠”轴，其中肠道菌群起到重要作用，具体机制尚不清楚［1］。中医学认为“肺与大肠相表里”，肺病包括COPD多表现胃肠道症状，如便秘、纳差等，且自古以来中医大家多从脾胃、大肠治疗多种肺部，均取得较好疗效。现代相关研究也发现肺与大肠之间存在功能相关，其中主要机制是其肠道菌群的改变［2］。本院长期使用院内保肺汤治疗COPD患者，取得良好疗效［3］，但其作用机制仍不明确。因此本研究将检测保肺汤治疗COPD患者前后肠道菌群及相关炎症指标的变化，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2017年1月至6月门诊或住院符合COPD 稳定期诊断的患者60例，随机均分为治疗组与对照组。其中男38例，女22例，平均年龄63岁。诊断标准：COPD疾病诊断按照中华医学会呼吸分会制定的《慢性阻塞性肺疾病的诊治指南》 标准，选择稳定期诊断标准［4］。患者中医证型选取辨证属于肺脾虚证，主要临床表型为：咳嗽，咯痰，喘息，短促无力，语音低微，自汗心悸，面色晄白，神疲乏力，食少便溏，舌淡苔少，脉弱。

1.2 治疗方法及样本留取 保肺汤主要组成：党参、黄芪、茯苓各15g，丹参、赤芍各20g，地龙、白术、浙贝、半夏、款冬花、杏仁各10g。治疗组患者在戒烟、氧疗、利尿、扩血管等西药应用基础治疗上，给予保肺汤1剂/d，分 2次服，疗程1个月。对照组则只给予戒烟、 氧疗、利尿、扩血管等西药应用基础治疗，疗程1个月。两组分别在干预前后留取患者新鲜粪便、血清置于-80℃低温冰箱储存。

1.3 观察指标 （1）肺功能及炎症指标检测：采用肺功能仪检测各组干预前后的FEV1%和FEV1/FVC比值，各组干预前后患者血清分别采用ELISA法检测CRP及TNF-α。（2）肠道菌群qPCR绝对定量：各肠道菌株引物参考相关文献［5］，引物序列具体见表1，由华大基因公司合成引物序列，建立肠杆菌、肠球菌、乳杆菌、双歧杆菌和总菌的基因标准品及构建标准曲线。收集各组干预前后患者的粪便提取其粪便DNA组，紫外分光光度计测定DNA浓度及纯度，且将各样本DNA稀释到相同浓度备用。qPCR绝对定量采用20μl反应体系：样本DNA模板/标准品DNA模板1μl，上、下游引物各1μl，灭菌蒸馏水7μl，SYBR Green SuperMix 10μl，稍震荡混匀且稍离心后进行real-time qPCR程序。qPCR扩增条件为：95℃预变性3min，55℃15s，进行40个循环，每个样本重复检测3次。数据由qPCR仪自带软件分析完成，根据标准曲线计算扩增效率E在90%～105%之间进行质控，且根据标准曲线线性方程得到各样本的拷贝数。

表1 引物序列

1.4 统计学方法 采用SPSS .18.0统计软件。计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗前后肺功能、CRP及TNF-α变化 见表2。

表2 治疗前后肺功能、CRP及TNF-α变化（x±s）

2.2 治疗前后肠道菌群改变情况 见表3。

表3 治疗前后肠道菌群改变情况［log10拷贝数/g粪便，（x±s）］

3 讨论

肠道菌群是遗忘的人体的巨大器官，肠道菌群在人体代谢、免疫、营养等方面发挥重要作用。消化道菌群构成和功能的改变可通过共同黏膜免疫系统影响呼吸道，而呼吸道菌群紊乱也通过免疫调节影响消化道，这种肠道和肺部相互影响的作用称为肺－肠轴（Gut-lung axis）［1］。肠肺轴理论表明健康的肠道菌群有利于肺部健康。相关研究发现COPD患者与健康对照组比较，其肠黏膜通透性显著增加，发生溃疡性结肠炎和克罗恩病的几率高出3倍［6］。且相关研究证明肠道菌群紊乱在败血症的发病中起关键作用，肺泡炎症反应与肺内微生物群发生改变有关，而肺内微生物群与肠道菌群可互相转变、迁移，TNF-α是调节肺部菌群稳态的重要中间物质［7］。因此，通过调节肠道菌群从而改善肺部慢性炎症成为改善COPD的一个重要新策略。本研究经保肺汤治疗后，相较于对照组及其治疗前，COPD患者慢性炎症指标CRP、TNF-α水平明显降低。

中医学认为“肺与大肠相表里”，现代研究通过肺肠轴理论解释，发现在肺病状态下，肠道的需氧菌如大肠杆菌、真菌显著增多，厌氧菌如类杆菌和双歧杆菌显著减少［8］。本资料结果显示，在COPD状态下双歧杆菌减少，肠杆菌增加，而通过保肺汤治疗后，明显降低了肠杆菌、肠球菌数量，增加了双歧杆菌数量。可见保肺汤可能是通过调节肠道菌群，降低了慢性炎症，从而改善COPD。