酢浆草的薄层色谱鉴别研究

★ 廖惠平* 陈思思 黄文平 吴欢 李志峰， 冯育林，＊＊ 杨世林，

(1.江西中医药大学 江西南昌330004;2.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 江西南昌330006)

1 实验材料

1.1 样品来源 本实验收集到不同批次的酢浆草样品共10批，来源于江西、安徽、云南等地，见表1。样品经江西中医药大学钟国跃教授鉴定为酢浆草(Oxalis corniculata L.)。

表1 药材信息

1.2 试药与试剂 刺槐素-6-C-β-D-葡萄糖苷对照品(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心对照品室分离制得，经面积归一法计算，含量大于98%)，硅胶G薄层板预制板(青岛海洋化工厂分厂)，薄层层析硅胶G薄层板预制板(青岛市基亿硅胶试剂厂)，薄层层析硅胶G(青岛海洋化工厂分厂);其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 样品前处理考察 酢浆草含有一些色素、糖类等杂质，故对前处理方法进行筛选。

2.1.1 提取方法的考察 方法一:取酢浆草粉末2g，加甲醇20mL回流提取1h，滤过，滤液备用。

方法二:取酢浆草粉末2g，加石油醚20mL回流提取1h，滤过，滤渣加甲醇20mL回流提取1h，滤过，滤液备用。

方法三:取酢浆草粉末2g，加石油醚20mL回流提取1h，滤过，滤渣加甲醇20mL回流提取1h，过滤，回收甲醇，残渣加水50mL置水浴锅中加热2h，趁热滤过，滤液用等量乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解。

方法四:取本品粉末2g，加甲醇20mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解。

以上4种溶液点于硅胶G薄层板上展开后经碘熏，结果表明，方法四的色谱斑点清晰，杂质干扰少，效果最好。

色谱柱：SinoChrom ODS-BP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.75%冰醋酸溶液（B），梯度洗脱（洗脱程序见表2）；流速：1.0 mL/min；检测波长：275 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL[14]。

2.1.2 提取溶剂考察 以50%乙醇，75%乙醇，95%乙醇，甲醇作为提取溶剂，按上述方法4操作，各溶液点于硅胶G薄层板上展开后经碘熏，结果表明，以甲醇提取效果最好，故选用甲醇作为提取溶剂。

2.1.3 提取溶剂用量考察 以甲醇为溶剂，加入量分别为10，20，40mL，按方法4操作，各溶液点于硅胶G薄层板上展开后经碘熏，结果表明，以20mL和40mL效果好，故选用加入量为20mL。

2.2 展开剂考察 ①二氯甲烷-甲醇-甲酸(7∶1∶0.1);②二氯甲烷 -甲醇 -甲酸(7∶2∶0.1);③二氯甲烷-甲醇(8∶2)。以上3个展开系统展开前须先用展开剂饱和15min后，上行展开后经碘熏。结果表明，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(7∶1∶0.1)分离效果最好，斑点清晰，Rf值适中。

2.3 点样量考察 对照品、样品点样量分别为1，2，3，4，5，10 μL，于硅胶 G 薄层板上展开后经碘熏，结果表明，对照品、样品的点样量均为5μL时分离效果好，斑点清晰。

2.4 展距考察 分别考察9，11，13cm，结果表明，展距在9～11cm时，斑点分离较好，无拖尾，Rf值适中。

2.5 展开湿度考察 加入不同浓度硫酸，调节展开缸内湿度分别为25%和72%，进行展开后经碘熏，结果表明，湿度为25%时，斑点分离效果较好，无拖尾。

2.6 展开温度考察 分别在4℃、16℃和25℃下展开后经碘熏，结果表明，在25℃时，分离效果好，斑点较为圆整清晰。

2.7 薄层板饱和时间考察 薄层板分别饱和5，15，30min，然后展开，结果表明，薄层板饱和15min或以上时，分离效果好，斑点圆整清晰。

2.8 不同薄层板的考察 分别选用自制手铺板、薄层硅胶预制板1(青岛市基亿硅胶试剂厂)和薄层硅胶预制板2(青岛海洋化工厂分厂)进行点样展开，结果表明，薄层硅胶预制板分离效果较好，斑点较为清晰圆整。

2.9 方法的确定及样品鉴别 供试品溶液的制备:取本品粉末2g，加甲醇20mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备:取刺槐素-6-C-D-葡萄糖苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

吸附剂:硅胶G薄层预制板;展开剂:二氯甲烷 -甲醇 -甲酸(7∶1∶0.1);显色剂:碘蒸汽，熏至斑点清晰，置可见光下检视。

图1 不同产地酢浆草样品薄层色谱图

表2 10批酢浆草药材薄层鉴别结果

点样量:5μL;展距:9～11cm;展开湿度:25%;展开温度:25℃;薄层板饱和时间:15min。

取10批酢浆草药材样品，按上述方法试验，结果表明，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的亮蓝色斑点，如图1和表2。

3 讨论

3.1 建立了酢浆草中刺槐素-6-C-D-葡萄糖苷的薄层色谱鉴别方法，该方法对酢浆草中刺槐素-6-C-D-葡萄糖苷的鉴别有较好的适应性，其方法简便，重现性好。

3.2 在酢浆草各样品薄层色谱中，2、4、7号样品在与对照品色谱相对应的位置上，蓝色斑点较弱，其余主要色谱斑点强弱略有一定的差异，可能与药材的来源产地不同有关。

［1］江西省卫生厅.江西省中药材标准［S］.南昌:江西科学技术出版社，1996:199.

［2］江毅，李朝斗，杨卫平，等.草药彩色图集［M］.贵州:贵州科学技术出版社，2001:324.

［3］李良，李传芹.酢浆草的临床应用［J］.中医临床与保健，1992，4(4):49-50.

［4］刘世旺，徐艳霞，石宏武.酢浆草乙醇提取物对细菌生长曲线的影响［J］.北方园艺，2007(3):113-115.