CAMK1及SPHK1在胰腺癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系

李梅桂 黄国定 刘海剑 曾业平 陈其珠

海南西部中心医院肿瘤内科，儋州 571799

【提要】 回顾性分析105例行手术切除且经病理确诊的胰腺癌患者的临床资料，探讨胰腺癌组织CAMK1、SPHK1的表达与临床病理特征及预后的关系。结果显示，胰腺癌组织CAMK1、SPHK1均呈高表达，其高表达组的临床分期，远处转移及脉管浸润与低表达组比较，差异均有统计学意义，且高表达与患者的总生存期短有关，是影响胰腺癌患者预后的生物学指标。

研究表明，钙/钙调素依赖性蛋白激酶1(calcium/calmodulin-dependent protein kinase 1，CAMK1)作为具有重要生理功能的蛋白激酶，在消化道肿瘤中异常表达，且与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等生物学特性显著相关，有望作为胰腺癌预后判断的潜在标志物[1]。鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1，SPHK1)是一种促进肿瘤转移和侵袭的癌基因，调控包括抑制细胞凋亡、促进细胞增殖和血管生成等多种生物学过程，在肿瘤发生、发展中起到关键作用，可能为胰腺癌的诊疗提供重要的信息[2]。但CAMK1、SPHK1在胰腺癌中的表达及其临床意义尚未清楚。本研究通过分析CAMK1、SPHK1在胰腺癌组织中的表达情况，探讨它们与临床病理特征的关系及其对胰腺癌患者预后判断的价值。

一、资料与方法

1．一般资料 ：选取2017年1月至2020年12月间海南西部中心医院行手术治疗且经病理确诊的原发性胰腺癌患者105例。纳入标准为(1)胰腺癌的诊断符合《胰腺癌综合诊治指南》(2018年版)[3]；(2)首次确诊并接受手术治疗。排除标准为(1)合并其他恶性肿瘤及严重疾病；(2)确诊时已接受过其他治疗；(3)随访过程中不配合，资料不齐全者。记录患者的性别、年龄及肿瘤大小、部位、组织学类型、临床分期、分化程度、是否转移等。本研究经医院伦理委员会批准，患者及家属知情同意。

2．胰腺癌组织CAMK1及SPHK1表达检测：术中分别采集患者的癌组织及癌旁正常胰腺组织标本置入甲醛溶液中固定，石蜡包埋并制备病理切片，使用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法检测并进行染色。兔抗人多克隆抗体CAMK1及SPHK1均购自北京博奥森生物有限公司。结果判定标准参考文献[4-5]，CAMK1、SPHK1蛋白阳性细胞以胞质出现棕黄色的颗粒样着色为准，按阳性细胞数的比例计分：<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；按染色强度计分：未着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两者相乘得到最终得分，<4分为低表达，≥4分为高表达。采用电话或门诊就诊等方式进行随访，随访截止时间为2021年7月，总生存率为自确诊第1天至患者死亡的时间。

3．统计学处理：采用SPSS22.0软件进行数据分析。计数资料以例(%)表示，组间比较采用χ2检验。单因素生存分析应用Kaplan-Meier法，组间比较行Log-rank检验，多因素生存分析应用COX回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。

二、结果

1．临床资料：105例患者中，男性64例，女性41例，年龄37～71(58.6±7.9)岁。胰腺导管腺癌95例，其他亚型肿瘤10例；肿瘤位于胰头69例，胰体20例，胰尾16例；Ⅰ～Ⅱ期31例，Ⅲ～Ⅳ期74例；低分化43例，中分化45例，高分化17例；远处转移60例，无远处转移45例。

2．胰腺癌及癌旁组织CAMK1、SPHK1蛋白表达：与癌旁正常胰腺组织比较，胰腺癌组织CAMK1、SPHK1蛋白均呈高表达，差异有统计学意义。105例胰腺癌中，CAMK1高表达68例，低表达37例；SPHK1高表达72例，低表达33例(表1)。

表1 胰腺癌及癌旁正常胰腺组织CAMK1和SPHK1蛋白表达情况[例(%)]

3．CAMK1、SPHK1蛋白表达水平与胰腺癌临床病理特征的关系： CAMK1、SPHK1高表达组的临床分期、远处转移及脉管浸润与CAMK1、SPHK1低表达组比较，差异均有统计学意义(表2)。

表2 CAMK1、SPHK1蛋白表达水平与胰腺癌患者临床病理特征的关系[例(%)]

4．CAMK1、SPHK1蛋白表达水平与胰腺癌患者总生存率的关系： 105例患者的随访时间为7～39个月，中位随访时间为21个月。生存分析结果显示，CAMK1高表达患者总生存率明显低于CAMK1低表达患者，SPHK1高表达患者总生存率也明显低于SPHK1低表达患者，差异均有统计学意义(χ2值分别为14.53、12.37，P值均<0.001；图1、图2 )。

注：CAMK1为钙/钙调素依赖性蛋白激酶1图1 CAMK1高表达与低表达的胰腺癌患者总生存率比较

注：SPHK1为鞘氨醇激酶1图2 SPHK1高表达与低表达的胰腺癌患者总生存率比较

5．CAMK1、SPHK1蛋白表达水平与胰腺癌患者预后的关系：单因素分析结果显示，临床分期、远处转移、脉管浸润、CAMK1及SPHK1表达水平是影响胰腺癌患者预后的危险因素。多因素COX回归分析结果显示，Ⅲ～Ⅳ期(HR=1.774，95%CI1.306～4.105)、远处转移(HR=1.975，95%CI1.618～4.690)、CAMK1高表达(HR=3.764，95%CI2.948～7.793)及SPHK1高表达(HR=2.513，95%CI1.985～5.427)是影响胰腺癌患者预后的独立危险因素(表3)。

表3 影响胰腺癌患者预后因素的单因素及多因素回归分析

讨论CAMK1具有调节细胞生长及调控各种细胞功能信号通路的作用，与肿瘤侵袭和转移密切相关，在癌细胞增殖、分化和凋亡中起关键的调节作用[6]。Hu等[7]研究发现，CAMK1作为致癌因子，在恶性肿瘤中异常表达；同时作为潜在治疗靶点，可为恶性肿瘤治疗提供新的思路。SPHK1是一种调节细胞内鞘脂代谢的激活酶，可促进肿瘤细胞的分化、增殖和转移，同时可刺激血管新生和淋巴管生成，在恶性肿瘤的进展及预后中发挥重要的作用[8]。Park等[9]研究认为，SPHK1作为促进肿瘤转移和侵袭的癌基因，在结肠癌中明显上调，其高表达可抑制化疗药物对肿瘤细胞的效果，对结肠癌的治疗及预后判断有一定的指导作用。因此，推测CAMK1、SPHK1有望作为胰腺癌预后判断以及疗效监测的潜在标志物。

本研究结果显示，胰腺癌组织CAMK1、SPHK1阳性高表达率均明显高于正常胰腺组织，提示CAMK1、SPHK1在胰腺癌患者中存在高表达，可能参与胰腺癌的发病过程。Yuza等[10]研究发现，SPHK1表达水平在胰腺癌组织中明显高于非癌组织，SPHK1通过刺激癌细胞增殖促进胰腺癌的进展，可能是胰腺癌治疗的一个潜在手段。以往的研究表明，SPHK1表达与结肠癌的临床分期、远处转移及脉管浸润的发生显著相关，其高表达对患者的总生存率有极大影响，可能是结肠癌患者潜在的预后生物标志物和治疗靶点[11]。本研究发现Ⅲ～Ⅳ期、远处转移及脉管浸润的胰腺癌患者CAMK1、SPHK1呈高表达；Ⅲ～Ⅳ期、远处转移是影响胰腺癌患者预后的独立危险因素。其中Ⅲ～Ⅳ期患者预后不良的发生风险是Ⅰ～Ⅱ期患者的1.774倍，有远处转移的患者预后不良的发生风险是无远处转移患者的1.975倍，可见临床分期和远处转移对胰腺癌患者的预后影响极大。Liu等[12]研究认为，临床分期对胰腺癌患者的预后有重要影响(HR=2.091，95%CI1.060～4.125)，在实际工作中应注意此类人群的危险分层。Shi等[13]认为，远处转移是影响胰腺癌患者预后的独立预测因子(HR=2.893，95%CI1.334～3.893)，对患者预后判断有一定帮助。此外，本研究发现CAMK1、SPHK1高表达与患者的生存期短有关，且CAMK1及SPHK1呈高表达对胰腺癌患者的预后影响极大，是预测胰腺癌患者预后不良的重要标志物。Yu等[14]研究表明，SPHK1主要参与细胞外基质介导的细胞增殖、侵袭及转移，其高表达与胰腺癌患者的总生存期短显著相关，可作为判断胰腺癌预后的重要指标。另有研究表明，CAMK1高表达与患者的总生存率降低有关，在胰腺癌患者的病情进展中发挥作用，可作为胰腺癌患者预后判断的生物学指标[15]。由此可见影响胰腺癌患者预后的因素是多方面的，仅依靠临床病理特征或影像学检查不能做出准确判断，应多方面综合考虑，尤其是CAMK1、SPHK1在胰腺癌中应用价值。

综上所述，胰腺癌组织中CAMK1、SPHK1呈高表达，其高表达是影响胰腺癌患者预后的独立危险因素，对指导胰腺癌患者预后判断具有较好的帮助。但本研究病例来源较单一，缺乏大样本多中心的前瞻性研究，未来仍需更多的临床研究进一步证实。

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