红景天苷对人胰腺癌BxPC-3细胞裸鼠移植瘤生长的影响

寇玉彬 陆运松 陈小平

上海中医药大学附属曙光医院宝山分院 宝山区中西医结合医院胰胆外科，上海 201999

红景天是中国传统中药，其主要活性成分为红景天苷。大量研究证实红景天苷具有广泛的药理作用，在抗缺氧、抗衰老、抗肿瘤及免疫调节等方面得到了公认并广泛应用于临床[1-4]。研究证实胰腺肿瘤微环境早期出现的低氧状态(氧化应激)能诱导活化胰腺肿瘤细胞低氧诱导因子(hypoxia inducible factor, HIF)及下游活性因子过度表达，是肿瘤细胞上皮间质化重要的触发因子之一[5]，进而可促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。本研究根据胰腺癌微环境乏氧特性和红景天的抗缺氧特性，观察红景天苷对胰腺癌BxPC-3细胞裸鼠移植瘤的作用。

材料与方法

一、动物与试剂

18只雌性裸鼠，清洁级，由中国科学院上海实验动物中心提供，动物使用许可证号SYXK(沪)2016-004。人源胰腺癌BxPC-3细胞株购于上海润成生物科技有限公司。红景天苷购于上海源叶生物科技有限公司。Tunel试剂盒购于Roche公司。DAB浓缩型试剂盒购于上海长岛生物技术有限公司。

二、裸鼠皮下移植瘤模型建立及分组

收集经胰酶消化的对数生长期BxPC-3细胞，无血清培养基洗涤1次后调整细胞密度为4×107/ml。消毒裸鼠后于腋下皮下接种100 μl BxPC-3细胞悬液，含4×106个细胞。待移植瘤生长到瘤长径3～5 mm后，按数字表法将裸鼠随机分为对照组、红景天苷25 mg组和50 mg组，每组6只。对照组常规喂养，不给药。红景天苷25 mg组和50 mg组分别给予红景天苷25 mg·kg-1·d-1和50 mg·kg-1·d-1，均分早晚两次灌胃给药。3周后处死裸鼠，取出移植瘤称重、摄片，用游标卡尺测量移植瘤的最长径及最短径，根据公式V=ab2/2计算肿瘤体积，a为长径，b为短径。然后置-80℃冰箱保存。

三、移植瘤组织细胞凋亡检测

胰腺癌移植瘤组织块制作成0.5 cm×0.5 cm×0.3 cm，10%甲醛溶液固定48 h，常规石蜡包埋、切片，采用Tunel试剂盒检测细胞凋亡，严格按说明书操作。在ECLIPSE Ni显微镜200倍视野下采集样本相关部位拍照，DS-Ri2图像分析系统计算胰腺癌细胞凋亡率。

四、统计学处理

结 果

一、红景天苷抑制移植瘤的生长

对照组、红景天苷25 mg组和50 mg组移植瘤的重量分别为(1.561±0.416)、(0.742±0.272)、(0.276±0.064)g，体积分别为(2354.35±523.11)、(991.43±348.91)、(403.60±130.98)mm3，3组间差异均有统计学意义(P值均<0.01，图1、2)，提示红景天苷呈剂量依赖性抑制移植瘤的生长。

图1 对照组(上)、红景天苷25 mg组(中)和50 mg组(下)的移植瘤标本

图2 对照组、红景天苷25 mg组和50 mg组移植瘤的生长曲线

二、红景天苷诱导移植瘤细胞凋亡

对照组、红景天苷25 mg组和50 mg组移植瘤的细胞凋亡率分别为(23.74±5.88)%、(49.30±6.75)%和(64.97±6.99)%，3组间差异有统计学意义(P<0.01，图3)，提示红景天苷呈剂量依赖性诱导胰腺癌细胞的凋亡。

图3 对照组(3A)、红景天苷25 mg组(3B)和50 mg组(3C)移植瘤的细胞凋亡(Tunel染色 ×200)

讨 论

红景天的主要活性成分红景天苷对心血管、肝脏、神经等重要组织器官的缺氧有很好的保护作用[6]。研究证实红景天苷能显著抑制胃癌细胞增殖[7]；能抑制人乳腺癌细胞的侵袭、迁移及人脐静脉内皮细胞血管生成[8]；具有较好抑制肺癌、宫颈恶性肿瘤细胞增殖的作用[9]。

胰腺癌是临床常见的高度恶性肿瘤，其发病率呈逐年上升趋势。研究发现，胰腺肿瘤组织内部呈低氧环境，当恶性肿瘤生长接近2 mm时就需要新生血管来供血以增加供氧，而当肿瘤接近1 cm3时缺氧明显存在[10]。有学者研究红景天苷对低氧条件下乳腺癌细胞生长的干预作用时发现，红景天苷抑制肿瘤细胞增殖呈时间和剂量依赖，能显著抑制低氧诱导的肿瘤细胞增殖[11]。因此，能否利用红景天的抗缺氧作用来干预胰腺癌是本研究关注的重点。

本研究结果显示，红景天苷能显著抑制裸鼠胰腺癌移植瘤的生长，且呈现出显著的剂量相关性，与文献报道相似[12]。进一步的细胞凋亡染色结果表明，红景天苷能显著促进人源胰腺癌BxPC-3细胞移植瘤的细胞凋亡，且呈现与红景天苷明显的剂量依赖。有文献证实，红景天苷能抑制低氧诱导的HIF-1α和HIF-2α表达[13]，认为红景天苷可能用于HIF阳性的胰腺癌的治疗，由此提示传统中药红景天在胰腺癌的防治中可能大有作为，具体机制有待更加深入细致的研究。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突