康莱特注射液与光动力疗法联合治疗大鼠胰腺移植瘤

刘艳虹 贾林 潘锦瑶 罗维国

康莱特注射液与光动力疗法联合治疗大鼠胰腺移植瘤

刘艳虹 贾林 潘锦瑶 罗维国

目的探讨康莱特注射液与光动力疗法(PDT)联合应用对裸鼠胰腺癌移植瘤生长的抑制作用。方法将人胰腺癌细胞株SW1990移植至裸鼠皮下制备皮下移植瘤模型。60只荷瘤鼠按随机数字法分为6组：对照组，不予任何治疗；康莱特1组，激光照射前一天开始从尾静脉注射康莱特注射液1.25 g/kg体重，连续10 d；康莱特2组，同上法注射康莱特注射液2.5 g/kg体重；光动力(PDT)组，腹腔内注射Photosan 2 mg/kg体重，48 h后予激光照射；联合1组，治疗方法采用康莱特1组+ PDT组；联合2组，治疗方法为康莱特2组+PDT组。每组10只。每周2次测量肿瘤大小。PDT后14 d处死动物，取瘤块称重，计算抑瘤率。结果对照组、康莱特1组、康莱特2组、PDT组、联合1组和联合2组治疗后14 d的瘤体积分别为(550.08±52.46)mm3、(519.71±46.44)mm3、(405.29±38.67)mm3、(199.27±37.37)mm3、(107.47±14.13)mm3和(75.58±12.53)mm3；瘤重分别为(0.82±0.08)g、(0.77±0.06)g、(0.61±0.06)g、(0.41±0.05)g、(0.28±0.04)g和(0.16±0.04)g。2个联合组的肿瘤体积和瘤重明显小于其他各组(Plt;0.05)；联合1组抑瘤率从PDT组的50%上升到65.9%，联合2组上升到80.5%。结论康莱特与PDT联合应用可明显抑制移植瘤体积，有协同增效作用。

胰腺肿瘤； 光化学疗法； 康莱特注射液

我们以往的研究结果显示，单用光动力疗法(photodynamic therapy, PDT)治疗胰腺癌的作用有限，联合化疗既可增强PDT的肿瘤杀伤作用，还可以抑制转移灶的生长，有望成为一种有前景的抗肿瘤疗法[1-2]。康莱特注射液为中药薏苡仁中提取的天然抗癌活性物质，是我国自行研发的中药二类抗肿瘤新药，近年来广泛用于肝癌、乳腺癌、大肠癌等肿瘤的临床治疗。迄今尚未见中药与PDT联合治疗胰腺癌的研究报道。本实验比较康莱特和PDT单用及联合应用对裸鼠皮下胰腺癌移植瘤生长的影响，旨在探讨康莱特与PDT治疗胰腺癌是否有协同增效作用。

材料和方法

一、实验动物、细胞株和药物

选用5～6周的BALB/c nu/nu雄性裸鼠，体重约17～19 g，SPF级，由中山大学动物实验中心提供和饲养。高转移人胰腺癌细胞株SW1990从美国引进；光敏剂Photosan(光疗素)和PDT 630半导体激光机由德国 Diolitec 药厂生产，爱斯康(亚洲)有限公司惠赠；康莱特由浙江康莱特药业有限公司提供。

二、模型制备及分组治疗

胰腺癌皮下移植瘤模型的制备方法见文献[1]和[2]。制模后按随机数字法分为6组，每组10只。对照组，不予任何治疗；康莱特1组，激光照射前一天开始从尾静脉注射康莱特注射液1.25 g/kg体重，连续10 d；康莱特2组，同上法注射康莱特注射液2.5 g/kg体重；光动力(PDT)组，腹腔内注射Photosan 2 mg/kg体重，48 h后予激光照射；联合1组，治疗方法采用康莱特1组+ PDT组；联合2组，治疗方法为康莱特2组+PDT组。采用630 nm、120 J/cm2的激光照射20 min。

三、观察指标

激光照射前和照射后3、7、10、14 d测量肿瘤大小。照射后14 d颈椎脱位术处死裸鼠，取出瘤体称重。计算瘤体体积(V)，V=3/4·π·(b/2)2·a/2,式中a和 b分别代表肿瘤的长径和与之垂直的短径。分析抑瘤率，抑瘤率=[1-(治疗组平均瘤重/对照组平均瘤重)] ×100%。

四、统计学分析

结 果

一、胰腺癌移植瘤体积的变化

对照组与康莱特1组各时段移植瘤体积相比，无统计学差异(Pgt;0.05)；与对照组和康莱特1组比较，康莱特2组在治疗后10 d起，肿瘤体积缩小，有统计学差异(Plt;0.05)，但裸鼠尾静脉炎比较严重,发生率为100%；PDT组在激光照射后，瘤体表面出现不同程度的局部坏死，1周后部分坏死组织脱落、结痂，坏死边缘呈火山样瘤体隆起。治疗后7 d开始，PDT组的肿瘤体积显著低于对照组和康莱特1组(Plt;0.05)；联合组从治疗后3 d开始，瘤体体积明显缩小，较其他各组有统计学差异(Plt;0.05)。治疗后7 d开始，联合2组的移植瘤体积又较联合1组明显缩小(Plt;0.05，表1)。

表1 各种疗法对胰腺癌生长的影响

注：与对照组和康莱特1组比较，*Plt;0.05;与PDT组比较，#Plt;0.05;与联合1组比较，△Plt;0.05

二、胰腺癌瘤重和抑瘤率的变化

对照组、康莱特1组、康莱特2组、PDT组、联合1组和联合2组的瘤重分别为(0.82±0.08)g、(0.77±0.06)g、(0.61±0.06)g、(0.41±0.05)g、(0.28±0.04)g和(0.16±0.04)g；抑瘤率分别为0、6.1%、25.6%、50.0%、65.9%和80.5%。PDT组的瘤重显著轻于对照组和2个康莱特组(Plt;0.05)；联合组瘤重又明显轻于PDT组(Plt;0.05)。联合1组使PDT组50%的抑癌率上升到65.9%；联合2组使PDT组50%的抑瘤率上升到80.5%。

讨 论

光动力疗法具有毒性低、肿瘤靶向性较好和广谱抗肿瘤等优点，多用于食管癌、膀胱癌等空腔脏器肿瘤的临床治疗。1981年Holyke开创PDT治疗胰腺癌以来，有关学者进行了PDT治疗胰腺癌的实验研究[1-3]。2002年，Bown等[4]将带激光光纤的针经皮插入胰腺癌组织，首次开展PDT治疗晚期胰腺癌的I期临床试验，结果显示PDT治疗后绝大多数肿瘤发生坏死和缩小，患者中位生存期为9.5个月，44%患者生存时间超过1年，PDT有望成为胰腺癌姑息治疗的有效手段。

鉴于光敏剂在体内分布不理想，加上激光照射深度有限以及肿瘤界限不清，单用PDT疗效有限，对深部及较大体积的实体瘤也难获良效。2008年，我们发现联合应用小剂量吉西他滨使单纯PDT的抑瘤率从58.2%上升到84.4%，显著强于单用PDT治疗，既明显增强PDT的杀伤效应，又有助于减少化疗药物剂量和降低不良反应[1-2]。

康莱特注射液是我国自行研发的中药抗肿瘤新药代表，与放、化疗结合治疗肿瘤取得了良好疗效，主要治疗原则是西医攻邪，中医扶正[5-7]。实验和临床研究表明，康莱特能呈时间和浓度依赖性地明显抑制人胰腺癌细胞生长[5]；与5-FU或健择联合可明显提高抗实验性胰腺癌的疗效[6-7]；此外，康莱特联合低剂量顺铂和5-FU治疗12例晚期胰腺癌患者，总有效率达16.7%，临床受益反应率为58.3%[8]。本实验结果证实，康莱特确可显著增强PDT的抗肿瘤作用，且与康莱特剂量呈量-效关系，为其应用胰腺癌的临床治疗提供理论依据。

[1] 贾林,刘艳虹.光动力疗法对胰腺癌移植瘤的疗效及其时-效关系.中华胰腺病杂志，2008,8：95-99.

[2] 贾林，刘艳虹.吉西他滨联合光动力疗法治疗人胰腺癌裸鼠移植瘤的研究.中华消化杂志，2008,28：314-317.

[3] Kirveliene V,Grazeliene G,Dabkeviciene D,et al.Schedule-dependent interaction between Doxorubicin and mTHPC-mediated photodynamic therapy in murine hepatoma in vitro and in vivo.Cancer Chemother Pharmacol，2006,57:65-72.

[4] Bown SG,Rogowska AZ,Whitelaw DE,et al.Photodynamic therapy for cancer of the pancreas.Gut，2002,50:549-557.

[5] 鲍英,夏璐,姜华,等.康莱特诱导人胰腺癌细胞凋亡的实验研究,上海医学，2004,27:421-424.

[6] 王伟,金建光.康莱特联合5-FU治疗人胰腺癌PC-3裸鼠皮下移植瘤的实验研究，西安交通大学学报，2005，26:473-476.

[7] 梁智勇，王文泽，高洁，等.康莱特注射液合并健择对移植于裸鼠的人胰腺癌的疗效初步研究.中华肿瘤防治杂志，2006,13：177-180.

[8] 李青山，高旭红，刘兰芳，等.康莱特注射液联合低剂量顺铂和5-氟尿嘧啶治疗晚期胰腺癌的临床观察.肿瘤，2004,24:184-185.

2008-12-10)

(本文编辑：吕芳萍)

Effectofphotodynamictherapypluskanglaiteontransplantedpancreaticcancer

LIUYan-hong,JIALin,PANJin-yao,LUOWei-guo.

DepartmentofChineseMedicine,FirstPeople′sMunicipalHospitalofGuangzhou,Guangzhou510180,China

JIALin,Email:Email:jialin@medmail.com.cn

ObjectiveTo investigate the anti-tumor effects of a combination of Kanglaite injection (KI) and photodynamic therapy (PDT) on human pancreatic cancer SW1990 xenograft in nude mice.MethodsThe animal model of human pancreatic cancer was developed by suturing small pieces of SW1990 tumors into the dorsum of nude mice. 60 rats were randomly divided into six groups: group A (control group without treatment), group B (receiving 1.25g/kg KI via the tail vein prior to PDT and continuously for 10 days), group C (receiving 2.5g/kg KI via the tail vein continuously for 10 days), group D (PDT group, 2 mg/kg Photosan 48h prior to laser irradiation), group E (group B + group D), group F (group C+group D) with 10 rats in each group. The tumor sizes were measured twice per week. The mice were sacrificed on the 14th day of PDT treatment. The tumor was took out and weighted and the tumor inhibitory rate was analyzed.ResultsThe tumor volumes of group A to F were 9550.08±52.46)mm3, (519.71±46.44)mm3, (405.29±38.67)mm3, (199.27±37.37)mm3, (107.47±14.13)mm3and (75.58±12.53)mm3, the weight of group A to F were (0.82±0.08)g, (0.77±0.06)g, (0.61±0.06)g, (0.41±0.05)g, (0.28±0.04)g and (0.16±0.04)g, respectively. The tumor volumes and tumor weights of the two combined groups were significantly smaller than those in the other groups (Plt;0.05). The combination group of 1.25 g/kg KI increased the tumor inhibitory rate from 50% in PDT group to 65.9%. The combination group of 2.5 g/kg KI increased the tumor inhibitory rate to 80.5%.ConclusionsKI had attenuated effect on PDT therapy, and the combination of KI and PDT could significantly inhibit the tumor growth.

Pancreatic neoplasms； Photochemotherapy； Kanglaite injection

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2009.02.008

2006年广东省中医药管理局课题(1060049)

510180 广州，广州市第一人民医院中医科(刘艳虹、潘锦瑶、罗维国)，消化内科(贾林)

贾林，Email: jialin@medmail.com.cn