新型颜色荧光融合增强试剂显现潜血手印

王 跃 武 磊 王美佳 马 铮 李园园

（北京警察学院刑事科学技术系 北京 102202）

1 引言

在命案犯罪现场上遗留的作案工具、衣物、被服和其他物品上，通常会有血迹或潜在血液痕迹[1]，此类痕迹也是犯罪现场最常见的痕迹物证。无论是在犯罪现场还是在法庭科学实验室，刑事科学技术人员必须要对一些嫌疑痕迹做出分析，判断这些嫌疑印痕是血印痕还是其他的特殊斑迹印痕。而在实际犯罪现场勘查工作过程中，因在犯罪现场发现的许多血液印痕由于成痕介质含量小，与承痕体的背景颜色反差非常微弱，自然光线下难以发现和提取，更难对这些嫌疑痕迹做出分析和判断[2-3]。

目前，刑事科学技术专家和研究人员已经探索出了一系列理化增强提取方法，并取得了较为理想的增强效果，主要有血色原结晶显色法、准化氧化还原染色法和物理化学吸附显色法[4]。

血色原结晶显色法是早期的潜血印痕显现技术，是将血痕置在载玻片上加入如吡啶试剂，在显微镜下观察，吡啶与血红蛋白中的血红素、血晶素、血色原等物质反应衍生成粉红色的晶体。该方法被称为高山血色原结晶法，其灵敏度约0.001mg/L血液或血红蛋白0.1mg/L。血液的存在呈现阳性，但阳性的结果不一定就是血液。该方法适用于新鲜和陈旧血液的检测，有实验表明，该技术可以检测存留20年的陈旧血迹。李亚琴等用离心分离的检材浸洗液代替检材，与改良高山试剂进行血色原反应，用微量分光光度计测定吸收光谱判断检材是否含血，用常见的疑似血液/血斑，从保存时间、基质等方面验证血斑测定的特异性和检材的适应性。但总的来说，由于该法的复杂性，大多数刑事技术人员和实验室人员难以使用该显现方法[5]。

准化氧化还原染色法的反应原理是血液中存在着过氧化氢酶及血卟啉，血痕血卟啉环上的铁离子能够起触媒作用，使过氧化氢释放出初生态的氧，而初生态的氧能够氧化化学试剂，使其生成有色的化合物或复合物，从而使潜血印痕显现出来。但该方法存在的问题是：联苯胺是一种强致癌物，已在国际上被明确禁止。陈爱萍等测试四甲基联苯胺等显现法对DNA检验的影响[6-10]，但传统的四甲基联苯胺显现法，使用过程中，为保证血痕的原始性与可靠性，需反复固定, 操作程序复杂, 难以避免人为因素对血痕形态的破坏。鲁米诺和蓝星试剂显现法需反复调整过氧化氢的剂量，以获得理想的浓度后，且需使用大量的蒸馏水，容易造成血痕扩散，即使有发光效应，难以综合利用形态痕迹检验价值。

物化吸附显色法显现潜血印痕的原理，主要是生物染色剂与血液中的氨基酸非常敏感，试剂中的色团与氨基酸的氨基与氢键结合，其显色色团位移到氨基酸上而固定在潜血印痕纹线从而显现出潜血印痕。但该方法配方复杂、操作繁琐、应用范围有限、扩散和破坏大，暗色物体显示反差手印，有些试剂甚至有一定的毒性。此外，在溶液喷涂或涂抹显现过程中无法进行细化处理，特别是背景干扰形成的粘连性形态特征效果不佳，血量较小时，颜色较淡；血量较大时，容易粘连[11-12]。因此，该方法在实际现场勘查工作中应用较少。

微弱或潜在血液痕迹的增强和显现通常是通过物理显现法、化学显现法或理化显现法将微弱或不可见的潜在血痕增强为清晰形态痕迹的过程。微弱或潜在血液痕迹的种类和介质的多寡、承痕体的表面属性和光滑度、环境条件等诸多因素决定了潜血印痕显现技术和流程的多样化和复杂化[13]。每种显现方法都有其特定的适用对象，即适用于特定类型手印材料和特定特征的对象性能。没有任何方法是万能的，必须不断地探索新的技术和方法。

据相关文献报道[14-17]，荧光钙血迹蓝钠显现液能够有效增强常见非渗透地板上的潜血足迹，潜血足迹图案在浅色非渗透表面呈现亮蓝色。特别是田亚杰等[18]提出，荧光钙血迹蓝钠是一种便捷高效的潜在足迹增强提取方法，且在制作的12份生物检材中，利用STR多态性检验，12份生物检材中的23个基因座上所有位点全部能与已知样本完全匹配且同一认定。综上所述，荧光钙血迹蓝钠能够增强潜血印痕，且不影响DNA检验，具有一定的推广价值。在实践中发现，荧光钙血迹蓝钠显现潜血印痕后，能够在532nm激光下激发出强烈荧光，有效克服客体表面颜色背景干扰，尤其是荧光钙血迹蓝钠显现液不影响后期依据显现出的潜在血迹部位，定位提取生物检材的检验价值，达到痕迹形态检验和生物检验的综合利用。

上述文献中只提到荧光钙血迹蓝钠显现液能够有效显现潜血印痕，但对532nm激光下激发出强烈荧光有效显现渗透表面上的潜在或微弱血印痕均没有报道。因此，本实验利用荧光钙血迹蓝钠显现液直接处理典型的渗透表面8种颜色纸张样本，自然光下记录蓝色花纹后，使用532nm激光照射（Green-L滤镜）拍照记录，并与自然光下拍照提取效果进行比较，探索荧光钙血迹蓝钠试剂能否适用于不同颜色渗透客体上潜在或微弱血手印增强，探索建立一套适用于犯罪现场上微弱或潜在血液痕迹颜色和荧光融合快速增强方法，为基层刑事科学技术部门相关人员提供技术参考和支持。

2 实验

针对传统潜血显现试剂如结晶显色法、准化氧化还原染色法、化学反应显色法、物理化学吸附显色法等的局限性，通过Optosky手持拉曼光谱仪表征的优选浓度的荧光钙血迹蓝钠显现液与血的混合液，在自然光下与532nm激光照射下光谱具有明显不同，使用微雾雾化器雾化新型荧光钙血迹蓝钠显现液显现潜血手印，探索自然光下拍照及532nm荧光激发新型荧光钙血迹蓝钠增强透面潜在或微弱血手印，并按手印样本评价标准对显现效果拍照记录并分别赋值，统计显现效果及评价数据，判断新型荧光试剂显现新鲜、陈旧潜血印痕和颜色承痕体有无普适性。

2.1 实验材料

荧光钙血迹蓝钠（北京佳安华创科技有限公司）；无水乙醇（北京化工厂）；95%酒精（北京化工厂）；新鲜兔血（北京市第五肉联厂）；脱脂棉（可孚医疗科技发展有限公司）；赤、橙、黄、绿、蓝、青、紫、白8种A4打印复印纸（亚太森博经典高品乐A4打印复印纸）；烧杯（赣州金昌贸易有限公司）；磁棒（赣州金昌贸易有限公司）；超声波振荡器（无锡鼎实电子科技有限公司）；Optosky手持拉曼光谱仪（奥普天成科技有限公司）；鱼跃M104型雾化器；532nm激光光源（云南先勘科技开发有限公司）；数码照相机（佳能Canon EOS R7微单相机）、Green-L滤光镜（OOTEE FSJOT20220817014）。

2.2 荧光钙血迹蓝钠显现液

配制比例：荧光钙血迹蓝钠0.5g、1g、2g、4g；95%酒精1000mL。

配制方法：分别把0.5g（1g、2g、4g）荧光钙血迹蓝钠加入容积为2000mL的烧杯中，然后倒入95%酒精1000mL，使用磁棒搅拌3～5min，溶液充分溶解后，然后将烧杯放在超声波振荡器5min，显现液混合均匀后颜色为呈橙黄色透明状，将配置好的4种浓度的荧光钙血迹蓝钠显现液放在深色玻璃瓶中通风避光保存。

2.3 潜血手印样本评价标准

荧光钙血迹蓝钠显现液显现出的潜在血手印质量评定标准分别为a、b、c、d、e 5个等级：a级代表为没有显现出手印；b级代表为显现显出的手印上有不超过三分之一的乳突纹线的细节特征能够认定；c级代表为有三分之一到三分之二的乳突纹线细节特征能够认定；d级代表为有三分之二以上的乳突纹线细节特征能够认定，但还不尽完整；e级代表为整个手印全部细节特征基本上可以完整认定。

2.4 血液的配制

配制比例：兔血10mL；蒸馏水90mL。

配制方法：把10mL兔血加入容积为50mL的烧杯中，倒入90mL蒸馏水，使用磁棒搅拌3～5min，将烧杯放在超声波振荡器5min，将混合均匀的血液样品放在深色玻璃瓶中置于冰箱避光保存。

2.5 潜血手印样本的制作

2.5.1 优选荧光钙血迹蓝钠显现液浓度及手印样本制作

实验以白色A4复印纸为客体。选择荧光钙血迹蓝钠显现液的4种不同浓度，分别为5g·L-1、10g·L-1、20g·L-1、40g·L-1。由6名匿名志愿者，首先使用浸泡酒精的脱脂棉把手擦拭干净，待酒精挥发后，再使用浸润V兔血∶V蒸馏水比例为1∶10的脱脂棉均匀涂布手指，在图 1 所示白色A4复印纸的十字格内，分别捺印遗留5枚潜血手印样本。

图1 浓度优选实验的手印样本制作标准

采用浸泡法处理。将十字格内部实线剪开后，分别使用5g·L-1、10g·L-1、20g·L-1、40g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液进行处置，拼接后对比自然光下观察显现效果，并按2.3 潜血手印样本评价标准对显现效果自然光拍照记录并分别赋值，统计显现效果及评价数据，优选出荧光钙血迹蓝钠显现液的较佳配比浓度。

2.5.2 优选荧光钙血迹蓝钠显现液处置方法与手印样本制作

实验以白色A4复印纸为客体。随机选择20名志愿者，首先使用浸泡酒精的脱脂棉把手擦拭干净，待酒精挥发后，再使用浸润V兔血∶V蒸馏水比例为1∶10的脱脂棉均匀涂布手指，为丰富统计结果，在图2所示的方格内每名志愿者在白色A4纸张上重复捺印5次，最后，将纸张潜在或微弱血手印样本存放干燥纸箱中。

图2 处置方法优选手印样本制作标准

采用浸泡法、涂抹法、喷瓶喷涂法和微雾雾化法处理。将十字格内部实线剪开后，分别使用浸泡法、涂抹法、喷瓶喷涂法和微雾雾化法，用荧光钙血迹蓝钠显现液分别对4区域手印样本进行处置，拼接后对比观察显现效果，并按2.3潜血手印样本评价标准对显现效果拍照记录并分别赋值，统计显现效果及评价数据，优选出荧光钙血迹蓝钠显现液处置样本方法。

2.5.3 浓度优选后荧光钙血迹蓝钠处置新鲜与陈旧性手印样本制作

实验以白色A4复印纸为客体。随机选择20名志愿者，首先使用浸泡酒精的脱脂棉把手擦拭干净，待酒精挥发后，再使用浸润V兔血∶V蒸馏水比例为1∶10的脱脂棉均匀涂布手指，然后在图3所示的方格内每名志愿者在白色A4纸张上重复捺印5次，最后，将纸张潜在或微弱血手印样本存放干燥纸箱中。

图3 不同颜色A4纸张手印样本制作标准

采用优选的处置方法处理。处置潜在手印样本时，从十字格实线1处剪开，遗留时间分别为1d、4d、7d和14d时，优选的处置方法处理4区域潜在血液手印样本，然后拼接比对显现效果，并按2.3潜血手印样本评价标准对显现效果拍照记录并分别赋值，统计显现效果及评价数据，判断处置新鲜与陈旧性手印样本有无普适性。

2.6 优选后荧光钙血迹蓝钠显现液与血混合液拉曼光谱表征

2.6.1 显现溶液稳定性测定

取5mL显现溶液放入洁净的玻璃瓶中，自然光环境下，Optosky手持拉曼光谱仪3次测定显现溶液的光谱特征。

2.6.2 外置532nm激光照射显现溶液光谱测定

取5mL显现溶液放入洁净的玻璃瓶中，在30度角置532nm外激光照射，Optosky手持拉曼光谱仪内置激光照射同一部位测定显现溶液的光谱特征。

2.6.3 外置532nm激光照射混合溶液光谱测定

取5mL显现溶液放入洁净的10mL玻璃瓶中，将V兔血：V蒸馏水比例为1:10的血液5mL倒入上述瓶中，在30度角外置532nm激光照射，Optosky手持拉曼光谱仪内置激光照射同一部位测定混合液的光谱特征。

2.7 优选后显现液cm-1处置8种纸张潜血手印样本自然光下与激光激发荧光实验

2.7.1 浓度优选后荧光钙血迹蓝钠处置不同材质手印样本制作

实验以赤、橙、黄、绿、蓝、青、紫、白8种A4纸张为客体。匿名随机选择20名志愿者，首先使用浸泡酒精的脱脂棉把手擦拭干净，待酒精挥发后，再使用浸润V兔血∶V蒸馏水比例为1∶10的脱脂棉均匀涂布3个手指，然后在图4所示的方格内每个学生在赤、橙、黄、绿、蓝、青、紫、白8种A4纸张上重复捺印，最后，将纸张潜在或微弱血手印样本存放干燥纸箱中。

图4 不同材质手印样本制作标准

处置潜在手印样本时，采用优选的处置方法，对赤、橙、黄、绿、蓝、青、紫、白8种A4纸张比对显现效果，并按2.3潜血手印样本评价标准对显现效果拍照记录并分别赋值，统计显现效果及评价数据，判断处置8种手印样本有无普适性。

2.7.2 操作步骤

第一步，把制作好的赤、橙、黄、绿、蓝、青、紫、白8种A4纸张样本依次排列在桌面上。

第二步，把配制好的荧光钙血迹蓝钠显现溶液5mL倒入鱼跃M104型雾化器药盒中。

第三步，使用鱼跃M104型雾化器均匀喷涂赤、橙、黄、绿、蓝、青、紫、白8种A4纸张样本表面，在喷液过程中纸张上呈现蓝色手印图案。

第四步，喷涂处理1min左右，蓝色图案稳定后拍照记录，并按2.3潜血手印样本评价标准对显现效果拍照记录并分别赋值，统计显现效果及评价数据。

第五步，分别使用532nm激光灯照射，橙色滤光镜滤光，并按2.3潜血手印样本评价标准对显现效果拍照记录并分别赋值，显现效果及评价统计数据。

3 实验结果

3.1 荧光钙血迹蓝钠显现液浓度优选

实验结果表明：5g·L-1、10g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液没有沉淀物质，20g·L-1、40g·L-1的荧光钙血迹蓝钠显现液均有沉淀物质，20g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液沉淀较少，40g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液沉淀物质更多，20g·L-1、40g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液取上清液备用。

5g·L-1、10g·L-1、20g·L-1、40g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液均为橙黄色的透明液体，颜色深度依次为40g·L-1≈20g·L-1>10g·L-1>5g·L-1。

以白色A4复印纸为潜在手印样本，分别捺印遗留5枚潜血手印样本，按十字格内部实线剪开后，分别使用5g·L-1、10g·L-1、20g·L-1、40g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液使用浸泡法处置相应的区域样本，相应的区域样本，在浸泡过程中，各区域的指纹样本即时均有蓝色纹线出现，浸泡5s取出，自然条件晾干，在干燥过程中反差越来越明显，纹线越来越清楚，直到干燥完全，纹线颜色不再变化。

按2.3潜血手印样本评价标准对显现效果拍照记录并分别赋值，100枚潜血手印样，400个区域，均能够达到d级标准以上，d级标准35个区域，e级标准的365个区域，评价统计数据如表1所示。

表1 荧光钙血迹蓝钠显现液浓度优选评价统计数据

荧光钙血迹蓝钠显现液均有10mg·L-1的荧光钙血迹蓝钠显现液显现后，自然光下观察，反差最好，没有颜色背景；10g·L-1效果良好，稍有黄色背景，20g·L-1、40g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液处理的纹线反差明显、清晰连贯，背景染色较为严重，但均不干扰纹线的观察，如图5所示。

图5 荧光钙血迹蓝钠显现液浓度优选显现效果

从浓度分别为5g·L-1、10g·L-1、20g·L-1、40g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液综合显现效果和溶质量两方面均衡评判，5g·L-1的荧光钙血迹蓝钠显现液为优选浓度。

3.2 5g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液处置方法优选

将十字格内部实线剪开后，分别使用浸泡法、涂抹法、喷瓶喷涂法和微雾雾化法，用5g·L-1的荧光钙血迹蓝钠显现液分别以白色A4复印纸为客体4区域手印样本进行处置，实验结果如下。

浸泡法：在浸泡过程中，各区域的指纹样本即时均有蓝色纹线出现，浸泡5s取出，自然条件晾干，在干燥过程中反差越来越明显，纹线越来越清楚，直到干燥完全，纹线颜色不再变化。

涂抹法：在涂抹过程中，各区域的指纹样本即时均有蓝色纹线出现，自然条件晾干，在干燥过程中反差越来越明显，纹线越来越清楚，直到干燥完全，纹线颜色不再变化，但有涂抹条纹干扰。

喷瓶喷涂法：在喷瓶喷涂过程中，各区域的指纹样本即时均有蓝色纹线出现，自然条件晾干，在干燥过程中反差越来越明显，纹线越来越清楚，直到干燥完全，纹线颜色不再变化，但有点状痕迹图案干扰。

微雾雾化法：在微雾雾化沉降过程中，各区域的指纹样本即时均有蓝色纹线出现，自然条件晾干，在干燥过程中反差越来越明显，纹线越来越清楚，直到干燥完全，纹线颜色不再变化，基本没有颜色干扰。

按2.3潜血手印样本评价标准对显现效果拍照记录并分别赋值，100枚潜血手印样，400个区域，均能够达到d级标准以上，d级标准35个区域，e级标准的365个区域，评价统计数据如表2所示。拼接后对比观察显现效果如图6所示，并按2.3潜血手印样本评价标准对显现效果拍照记录并分别赋值，统计显现效果及评价数据，优选出荧光钙血迹蓝钠显现液处置为微雾雾化法。

表2 荧光钙血迹蓝钠显现液浓度优选评价统计数据

图6 浸泡法、涂抹法、喷瓶喷涂法和微雾雾化法显现效果

3.3 新鲜与陈旧性手印样本显现普适性实验

从十字格实线处剪开，对遗留时间分别为1d、4d、7d和14d的4区域手印样本，经微雾雾化法处理相应区域潜在血液手印样本，实验结果为：遗留时间分别为1d、4d、7d和14d时，将十字格内部实线剪开的以白色A4复印纸为客体4区域手印样本，在微雾雾化沉降过程中，遗留时间分别为1d、4d、7d和14d区域的指纹样本即时均有蓝色纹线出现，自然条件晾干，在干燥过程中反差越来越明显，纹线越来越清楚，直到干燥完全，纹线颜色不再变化，基本没有颜色干扰。

然后拼接比对显现效果，并按2.3潜血手印样本评价标准对显现效果拍照记录并分别赋值，统计显现效果及评价数据，按2.3潜血手印样本评价标准对显现效果拍照记录并分别赋值，100枚潜血手印样，420个手印，均能够达到d级标准以上，d级标准51个区域，e级标准的449个，评价统计数据如表3所示，显现效果如图7所示。

表3 新鲜与陈旧性手印样本评价统计数据

图7 新鲜与陈旧性手印样本显现效果

综上，5g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液微雾雾化法处置新鲜与陈旧性手印样本具有普适性。

3.4 优选后的显现液与混合液光谱测定

5g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液的自然光环境下，Optosky手持拉曼光谱仪3次测定显现溶液的荧光光谱峰值均在1400 cm-1处，如图8所示；外置532nm激光30度夹角照射，Optosky手持拉曼光谱仪测定5g·L-1显现溶液同一位置的荧光光谱位移至1800 cm-1处，如图9所示；外置532nm激光30度夹角照射，Optosky手持拉曼光谱仪血与5g·L-1显现液混合溶液的荧光频率位移至2300 cm-1处，如图10所示；外置532nm激光30度夹角照射，Optosky手持拉曼光谱仪测定的光谱，与5g·L-1显现溶液光谱图比较，混合溶液荧光散射光谱位移明显，区别极大。

图8 自然光环境下，Optosky手持拉曼光谱仪3次测定显现液的拉曼位移谱图

图9 外置532nm激光30度夹角照射，Optosky手持拉曼光谱仪内置激光测定显现溶液同一位置的拉曼位移谱图

图10 外置532nm激光30度夹角照射，Optosky手持拉曼光谱仪内置激光测定混合溶液同一位置的拉曼位移谱图

3.5 潜血手印样本显现自然光下记录与激光激发实验

5g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液 cm-1处置8种A4纸张潜血手印样本，在微雾雾化沉降过程中，遗留时间分别为1d、4d、7d和14d区域的指纹样本均有即时蓝色纹线出现，自然条件晾干，在干燥过程中反差越来越明显，纹线越来越清楚，直到干燥完全，纹线颜色不再变化，基本没有颜色干扰。

自然光下观察，红（A4纸）、橙（A4纸）、黄（A4纸）、绿（A4纸）、青（A4纸）、紫（A4纸）、白（A4纸）7种纸张上的420个手印，均能够达到d级标准以上，d级标准51个区域，e级标准的449个；蓝（A4纸）上的60个手印，b级标准22个区域，c级标准的 18个，d级标准的13个，e级标准的仅7个；在532nm激光激发，Green-L滤光镜，蓝（A4纸）、黄（A4纸）、绿（A4纸）、青（A4纸）、紫（A4纸）5种纸张上的300个手印，均能够达到d级标准以上，d级标准51个，e级标准的309个；白（A4纸）红（A4纸）、橙（A4纸）上的180个手印，b级标准44个，c级标准的 56个，d级标准的43个，e级标准的仅17个。评价统计数据如表4所示，自然光下记录与激光激发荧光效果如表5所示。

表4 自然光下记录与激光激发荧光评价统计数据

表5 自然光下记录与激光激发荧光效果

4 分析与讨论

8种潜血手印样本，与自然光线下直接拍照提取比较，荧光钙血迹蓝钠试剂颜色增强提取法取得了较为理想的显现效果，有效增强了颜色反差，提高了潜在痕迹的发现率、提取率、利用率。从样本承痕体颜色上比较，浅色的背景反差效果明显，蓝色纸张上有效增强性略低，可能原因是：荧光钙血迹蓝钠增强试剂与血液中蛋白质发生络合作用，形成的蓝色络合物及混合物将手印纹线显现出来，阳性颜色反应非常明显，而对于蓝色纸张的颜色与络合物及混合物的蓝色相近或同色，导致颜色反差明显降低。

与传统的溶液喷涂或涂抹显现法相比，使用鱼跃M104型雾化器直接雾化新型荧光钙血迹蓝钠显现液对潜血手印样本进行处理，自然光下拍照记录和激光激发荧光增强，均呈现较好的连贯性，无扩散现象，可能的原因是：传统的显现方法使用溶液或者涂抹，溶液浸泡法容易过度，涂抹法容易擦划痕迹，造成人为影响；而该实验使用的是微孔雾化法，显现液经雾化后，溶剂可能在沉降过程中挥发掉大部分，而溶质沉降吸附在承痕体与介质上，溶质与介质接触均匀，且不受如鲁米诺显现法中大量水溶液影响，不会发生扩散现象，因而显现出的手印纹线清晰连贯、反差明显。

遗留时间分别为1d、4d、7d、14d的潜血手印变化不大，可能原因是：血迹干燥后，血迹中荧光钙血迹蓝钠反应的成分基本不变，因而显现效果基本不变，也具有显现新鲜和陈旧手印的普适性。

测定显现液与混合溶液的荧光光谱峰值位移较大，可能原因是：由于血液中的蛋白作为一种阳离子，结合阴离子荧光钙血迹蓝钠形成蓝色化合物，导致了荧光光谱峰值位移，也正满足了潜血手印显现需求。

使用鱼跃M104型雾化器直接雾化新型荧光钙血迹蓝钠显现液对潜血手印样本进行处理，自然光下拍照记录，然后使用532nm激光照射（Green-L滤镜），可以有效增强渗透表面上的潜血手印。由于显现溶液的荧光频率位移至1400 cm-1处、532nm激光表征显现溶液的荧光频率位移至1800cm-1处、血与显现液混合溶液的532nm激光表征荧光频率位移至2300cm-1处，荧光光谱散射光的频率位移较大，新型荧光钙血迹蓝钠显现液对潜血手印增强后的手印纹线清晰连贯、反差明显。

白色纸张在自然光下观察蓝色纹线反差非常明显；而在532nm激光激发下，Green-L滤镜观察荧光反差比较小，究竟是因白色纸张中增白颜料或是因纸张填充材料激发出的相同或相近的荧光光谱仍需进一步探索。

5 结语

本实验针对传统潜血显现试剂（如结晶显色法、准化氧化还原染色法、化学反应显色法、物理化学吸附显色法等）的局限性，通过Optosky手持拉曼光谱仪表征的荧光钙血迹蓝钠显现液与血的混合液，在自然光下与532nm激光照射下光谱具有明显不同，使用新型荧光钙血迹蓝钠用于显现8种A4纸张上潜血手印的实验，探索荧光钙血迹蓝钠显现液的适用客体及实际显现效果。实验结果表明，使用5g·L-1、10g·L-1、20g·L-1，40g·L-1等4种浓度的荧光钙血迹蓝钠显现液优选实验中，荧光钙血迹蓝钠显现液最佳浓度为5g·L-1和10g·L-1之间，优选荧光钙血迹蓝钠显现液的浓度为5g·L-1。因为20g·L-1及40g·L-1均有沉淀，说明过多溶质无法继续溶解，也容易造成溶质浪费，且不会有较大显现效果提升，也容易造成污染。

使用优选浓度为5g·L-1荧光钙血迹蓝钠显现液，对遗留时间分别为1d、4d、7d、14d白色A4纸张上新鲜及陈旧性手印样本实验结果表明，荧光钙血迹蓝钠显现液对遗留时间不同的潜血印痕显现效果区别不大，说明光钙血迹蓝钠显现液既能够显现新鲜的潜血印痕，又能够有效显现陈旧的潜血印痕，对不同时间的潜血印痕显现具有普适性。

使用优选浓度为5g·L-1的荧光钙血迹蓝钠显现液处置赤、橙、黄、绿、蓝、青、紫、白8种A4纸张上潜血手印样本表明，赤、橙、黄、绿、蓝、青、紫、白8种A4纸张上潜血手印样本均能够明显增强，虽然蓝色纸张手印纹线颜色与蓝色纸张颜色趋同，但在潜血印痕发现中反差也极其明显，如图11所示，如需达到鉴定条件，还要借助其他光源进一步处理。

图11 蓝色纸张上自然光与532nm下显现效果

使用优选浓度为5g·L-1的荧光钙血迹蓝钠显现液及与血的混合液，自然光下使用532nm激光照射下稳定性光谱特征，3次测定显现溶液的荧光光谱峰值均在1400cm-1处，表明光谱特征稳定；而532nm激光表征显现溶液的荧光光谱位移至1800cm-1处、血与显现液混合溶液的532nm激光表征荧光峰值位移至2300cm-1处，荧光光谱峰值位移明显，其光谱区别极大，表明荧光钙血迹蓝钠显现液能够用于潜血印痕的荧光增强显现；但实验结果表明，不同的颜色纸张荧光背景强弱不同，表明荧光钙血迹蓝钠显现液对不同客体的荧光背景具有选择性，不具有普适性，使用荧光增强适应该考虑个体的适用性。

综上，新型荧光钙血迹蓝钠试剂的在显现潜血手印上既有颜色增强，又有荧光增强，在性能上相互补充，产生协同效应，能够有效增强常见纸张表面上的微弱血手印或潜在血手印。且使用微雾雾化方式显现潜血手印，既能够确保手印降低人为破坏程度，又能够确保溶质与手印介质均匀反应。荧光钙血迹蓝钠试剂经前期检验，尚未检测到对人体有危害性，在雾化使用过程中做好气溶胶防护即可。新型荧光钙血迹蓝钠试剂显现出手印，经拍照记录供形态检验，而不损害后期DNA检验价值，并且能够有效靶向定位提取血痕DNA检材，可有效提高形态检验和生物DNA个体识别的综合应用价值，是一种便捷高效的潜血手印增强方法。