湖北地区老年人群SLCO1B1基因多态性分析△

文 双 王鹏云

(华中科技大学同济医学院附属梨园医院检验科 武汉 430077)

有机阴离子运输多肽1B1(OATP1B1)是表达在肝细胞膜上的摄取转运蛋白，介导多种内源性代谢物和药物的吸收，如：他汀类、利福平、卡泊芬净、伊立替康及其活性代谢产物SN-38等[1～5]。SLCO1B1 基因具有遗传多态性，c.521T>C(rs4149053) 和c.388A>G(rs2306283)是最常见的与其功能紧密相关的两个SNP位点，可形成9种基因型(*1a/*1a、*1a/*1b*、1b/*1b、*1a/*5、*1a/*15、*1b/*15、*5/*5、*5/*15及*15/*15)，其突变型引起编码的OATP1B1 转运蛋白活性降低[6～8]，表现为肝脏摄取药物能力降低，使得血药浓度上升，增加药物不良反应的发生风险，具有临床诊断价值。

c.521T>C和c.388A>G多态在不同遗传背景人群中频率具有较大差异，了解其在不同地域群体中的频率分布对于了解其对不同群体的诊断价值具有重要意义。本研究的目的在于了解我国湖北地区老年人群SLCO1B1基因多态性分布特征，探讨性别对SLCO1B1基因多态性的影响，辅助临床合理调节用药剂量。

1 研究对象和方法

1.1 研究对象

选择2016年7月～2021年2月在我院遵医嘱接受SLCO1B1基因多态性临床检测的患者1814例，纳入对象年龄≥60岁，平均年龄(75.8±10.0)岁，其中男882例，女932例，所有入选者均为湖北地区汉族常驻居民，相互之间无血缘关系。

1.2 研究方法

1.2.1基因组DNA的提取

采集患者外周血1ml于EDTA抗凝管。使用天根生化科技有限公司血液基因组提取试剂盒(TIANamp Blood DNAKit，DP318)进行基因组DNA的提取。

1.2.2基因分型

使用PCR-荧光探针法检测进行SLCO1B1基因c.388A>G、c.521T>C位点基因分型。PCR反应试剂购于武汉友芝友医疗科技有限公司。反应体系为25ul，包括DNA模版0.2ul (25ng/ul)，反应液23ul(含有PCR 缓冲液、dNTPs、特异性引物和探针、内标引物)。PCR反应程序为：37℃ UNG处理10 min，95℃预变性5min，然后95℃ 15s 、60℃ 60s反应40个循环(采集荧光信号)。反应结束后，根据扩增曲线，划定合适基线和荧光阈值，得到不同荧光通道CT值并进行结果判读，确定每个样本各个位点的基因型。

1.3 统计学分析

应用统计学软件SPSSversion20.0完成数据分析，两组间分类变量的频数分布差异采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 荧光定量PCR结果判读

以SNP c.388A>G为例，ROX通道为内标基因，所有检测中ROX通道CT值≤38。FAM通道CT值≤36，VIC通道CT值≥36或无CT值，即表示为AA野生型；FAM、VIC通道CT值均≤36，则为AG杂合突变型；而VIC通道CT值≤36，FAM通道CT值≥36或无CT值，即表示为GG纯合突变型。

2.2 湖北地区老年人群SLCO1B1基因等位基因频率及基因型分布

本研究中，1814例湖北地区老年人群SLCO1B1基因分型结果显示(见表1)， SNP 388A>G位点检测出野生型233例，杂合突变型660例，纯合突变型921例，3种基因型A/A、G/A、G/G分别占 12.84%、36.38%、 50.77%，等位基因突变发生率为68.96%；而521T>C位点检测出野生型1472例，杂合突变型322例，纯合型突变20例，3种基因型A/A、G/A、G/G分别占 81.15%、17.75%、 1.10%，等位基因突变发生率为9.98%，见表1。

表1 SLCO1B1基因c.388A>G、c.521T>C位点等位基因频率及基因型分布[n(%)]

2.3 湖北地区老年人群SLCO1B1基因多态分布

本研究共检测出8种SLCO1B1基因型， 其中*1b/*1b及1a/*1b型最多，分别占38.2%和31.64%，其次为*1b/*15 、*1a/*15、 *1a/*5，而未检测到*5/*5基因型。各基因型在男女群体间的分布比较显示差异无统计学意义，见表2。

表2 SLCO1B1基因c.388A>G、c.521T>C多态性分布[n(%)]

3 讨论

有文献报道，在高加索人群中SLCO1B1基因SNP c.388A>G、c.521T>C 突变频率分别为 25%～30%和15%～20%[9]，而本研究中，湖北地区老年人群SLCO1B1 SNP 388A>G突变频率为68.96%，高于白种人；521T>C 突变频率为9.98%，低于白种人，这也证实了SLCO1B1 基因多态性分布具有明显种族和地域差异。SLCO1B1基因型以*1b/*1b及1a/*1b最常见，占69.84%，其次是*1b/*15(11.63%) 、*1a/*1a(11.30%)、*1a/*15(4.58%)、 *1a/*5(1.54%)，*15/*15(0.94%)、*5/*15(0.17%)，结果符合亚洲人群SLCO1B1 基因多态性的分布特征[10～14]。

研究表明，SLCO1B1遗传多态性可对多种药物的血浆浓度产生显著影响。SLCO1B1 c.521T>C变异与血浆瑞舒伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀浓度升高和普伐他汀对肝脏胆固醇合成的短期抑制作用降低有关[15～17]。由于他汀类药物通过抑制肝细胞中的HMG-CoA还原酶发挥作用，因此，OATP1B1介导的他汀类药物的肝摄取可能是他汀类药物发挥治疗作用的先决条件。另外，他汀类药物的全身不良反应，如肌病和横纹肌溶解症，与血浆他汀类药物浓度增加有关[18～19]。因此，SLCO1B1多态性可能与他汀类药物治疗期间的疗效降低及全身不良反应风险增加有关。

在糖尿病治疗药物中，OATP1B1对瑞格列奈、那格列胺等药代动力学有着重要影响，521T>C突变型中瑞格列奈的血清药物浓度是野生型的3倍，那格列胺的血清药物浓度是野生型2倍[20]。许多抗感染药类也通过OATP1B1的摄取进入肝脏细胞，如利福平和青霉素以及某些头孢类均是OATP1B1的底物。

本研究通过检测老年汉族人群的SLCO1B1基因型，可评估药物临床效益及风险比，调整老年人群的联合用药方案，更好地为临床医生个体化用药提供参考，减少老年人群不合理用药。