江津区新生儿串联质谱法遗传代谢病筛查研究

白文学 龙川江

(重庆市江津区妇幼保健院 重庆 402260)

遗传代谢病(先天性代谢缺陷)有1000多种，单一发病率较低，总发病率较高。有调查表明，新生儿的遗传代谢病发病率超过0.5%[1]。目前，美国、日本等发达国家已全面覆盖串联质谱技术，用其进行普查新生儿是否患先天代谢病[2]。随着串联质谱法在全世界的推广及应用，它在我国医学临床上逐渐广泛地应用于筛查与诊断。江津地区妇幼保健院联合重庆金域医学检验所有限公司中心实验室研究员，计划于2018年3月～2018年6月这段时间内投入使用串联质谱法，筛选与诊断3200例新生儿遗传代谢病。现将结果叙述如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

在家属签订《用串联质谱法筛查新生儿是否患先天代谢疾病》同意书后，选取于2018年3月～2018年6月在江津妇幼保健院待出生和已出生的3200例新生儿，其中男1700例，女1500例；早产儿(孕周<37周)46例，足月儿(孕周≥37周)3154例。经SPSS19.0数据统计后，发现P>0.05，因此性别比例可作为无关因素处理。

1.2 方法

1.2.1标本的采集

在新生儿的足跟扎微量的血液于干血滤纸片上，得到均匀血斑，让其在15～22℃无菌空气中自然风干3～4h后，置于塑料袋封口，存在-20℃环境中备检[3]。

1.2.2仪器与试剂

采用三重四极杆质谱仪，仪器型号API3200MDTM，该仪器主要用于确定人体样本中的无机或有机化合物,临床应用中主要用于定性定量分析，如内源性物质如氨基酸类、肉毒碱和糖类物质、外源性物质等。采用广州南杰生物技术有限公司生产的样本释放剂，也是诊断剂。将诊断剂的1mL样本释放剂的萃取液于2～8℃中密封放置，使用前将其置于18～25℃的环境中，作为工作剂备用[4～5]。将打孔器在干血滤纸片的血斑标本处打孔，将含不同标本血斑的打孔片各放入100μL的工作剂中，45℃震荡45min，各取75μL打入V型底，耐热微孔板内封装置后，打开电源，启动仪器，让其自动分析[6]。

1.2.3假阳性复查

若出现初筛指标高于1.5倍标本，则需及时联系出现可疑阳性新生儿的家长，带其进行复查，用串联质谱仪器重新检测采集的血液标本。复查后标本值指标仍高于1.5倍，则联系家长检测尿液的有机酸含量，静脉基因顺序，同时计算、分析基因突变的概率[7]，在确诊后通知家长带新生儿进行治疗。

1.2.4质量控制

江津区妇幼院的采血人员及地方卫生部基层管理员要经过专业的培训。血样采集和保存工作由经过培训的采血人员负责，地方卫生部基层管理员负责传送血样标本，妇幼院和新生儿疾病筛查中心有串联质谱法检验人员和研究员。

1.3 数据处理与分析

采用SPSS19.0统计数据结果，用描述统计法进行统计分析，地区分布服从χ2检验。

2 结果

2.1 新生儿参与串联质谱疾病筛查情况

2018年3～2018年6月期间，江津区妇幼保健院共筛查3200例新生儿，采用传统的ELISA检测技术检测苯丙酮尿症、先天性甲状腺功能减退、G6PD、先天性肾上腺皮质增生症四症的新生儿共464例，质谱筛查法(四症普查和46种遗传代谢疾病串联质谱筛查)2736例，质谱筛查率达85.83%，见表1。

表1 2018年3月～2018年6月江津市质谱法筛查疾病情况

县市区质谱筛查人数总筛查人数质谱筛查率(%)市区1043118987.72几江街道18518997.88德感街道15319279.68慈云镇19620695.14白沙镇30234088.82广兴镇8822040.00嘉平镇15215598.06四平镇21726083.46西湖镇22929976.58永兴镇28831092.90石门镇34736894.29合计3200372885.83

由表1可得，χ2=1069.08，P<0.05，表明结果具有统计学差异。

2.2 串联质谱法与传统疾病筛查法比较

MS/MS检查的假阳性率低于传统ELISA检测方法，χ2=7.98，P<0.05，表明结果具有统计学差异，见表2。

表2 MS/MS与传统疾病筛查法比较

筛查方法筛查正常可疑阳性复查正常待确诊复查正常复查正常总数假阳性率(%) 串联质谱法3200201220.50传统ELISA检测320036812.22

2.3 MS/MS检出疾病情况

MS/MS筛查出患病新生儿4例，检出率为1/800。其中有机酸代谢病：甲基丙二酸血症1例(女)；脂肪氧化疾病：酰基辅酶脱氢酶缺乏症1例(男)；氨基酸代谢疾病：苯丙酮尿症1例(女)；尿素循环障碍：新生儿胆汁积留1例(男)。

3 讨论

江津区妇幼院联合重庆金域医学检验所有限公司中心实验室将串联质谱法(MS/MS)应用于3200例新生儿的代谢疾病筛查研究过程发现，质谱筛查率达85.83%。与普通的新生儿遗传代谢疾病相比，利用传统的ELISA检测技术，一项实验只能检测一种疾病，周期长、耗资高[7]，受客观因素影响大，假阳性高，使疾病的筛查范围受到局限，易造成遗传代谢病的漏诊误诊。MS/MS检测的假阳性率为0.50%，传统的ELISA检测技术的假阳性率为2.22%，数据对比可知MS/MS与传统的ELISA检测技术相比，MS/MS检查的假阳性率低于传统ELISA检测方法。说明MS/MS检测的确诊率高于ELISA检测法，能减少复查率，减少新生儿家长的精神及经济负担，对新生儿的遗传代谢疾病有非常重要的作用[8～9]。

MS/MS可检测氨基酸代谢疾病、有机酸血症、脂肪酸氧化等多项疾病，3200例婴儿中查出有4例婴儿患遗传代谢疾病。MS/MS实现了一次检测多个病种、检测时间缩短、特异性灵敏度提高等目标，因而MS/MS能在短周期内实现大量遗传代谢疾病的快速、精准、低耗资检测，减小新生儿遗传代谢病的发病率，对江津市乃至更多地区的出生人口预防遗传代谢疾病及提高人口素质有重要有非常重要的意义[10]。通过筛查的方法，让孕妇在产前得知腹中胎儿是否患了代谢疾病，因而能提前诊断、治疗；若筛查过程中不能查出有先天畸形，则在新生儿出生后不久，抽取新生儿微量血液进行复查，将先天代谢异常或身体结构异常带来的损伤降低到最小值。除此之外，MS/MS检测技术对想生二胎的家长有不可替代的指导意义，能让该类家长避免生育患先天遗传代谢病的患儿及教育患儿成长。

综上所述，串联质谱检测法能检测可氨基酸代谢疾病、有机酸血症、脂肪酸氧化等多项疾病；能在早期发现新生儿患遗传代谢疾病的具体情况，降低患病假阳性率，确诊率高；让患儿能得到及时的治疗；检测周期短、精确、操作简单，进而能增大检测的新生儿例数，降低耗资，为临床推广MS/MS检测技术提供依据，为预防及治疗先天性遗传代谢病提供参考。